湖北中医药大学（湖北中医学院）：《生物化学检验》课程教学资源（PPT课件）第五章 常用生物化学检验技术（光谱分析技术）

第五章 常用生物化学检验技术

1 常用生物化学检验技术 第五章

本章内容概要 第一节光谱分析技术 第二节电化学分析 第三节电泳技术 第四节层析技术 第五节离心技术 第六节自动生化分析技术 只讲第一节，其它内容在《临床检验 仪器学》中讲授

2 第一节 光谱分析技术 第二节 电化学分析 第三节 电泳技术 第四节 层析技术 第五节 离心技术 第六节 自动生化分析技术 只讲第一节，其它内容在《临床检验 仪器学》中讲授。 ◼本章内容概要

教学目标和要求 1、掌握分光光度技术的基本原理及定性和定量方法。 2、熟悉分光光度计的的基本结构和操作方法光源检查 和波长校正、原子分光光度计的类型和影响荧光分析的 因素 3、了解其他光谱分析技术的基本原理及在生化检验中 的应用

3 ◼教学目标和要求 1、掌握分光光度技术的基本原理及定性和定量方法。 2、熟悉分光光度计的的基本结构和操作方法光源检查 和波长校正、原子分光光度计的类型和影响荧光分析的 因素 3、了解其他光谱分析技术的基本原理及在生化检验中 的应用

第一节 光谱分析技术 分光光度技术的基本原理 ■分光光度计的基本结构 ■分光光度计的操作方法 ■分光光度技术的定性和定量方法

4 第一节 光谱分析技术 ◼分光光度技术的基本原理 ◼分光光度计的基本结构 ◼分光光度计的操作方法 ◼分光光度技术的定性和定量方法

光谱分析技术原理： 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征， 以此来确定物质性质、结构或含量。 光谱分析技术分类： 发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法 吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光 度法和红外光谱法 散射光谱分析技术：比浊法 5

5 ◼光谱分析技术原理： 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征， 以此来确定物质性质、结构或含量。 ◼光谱分析技术分类： 发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法 吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光 度法和红外光谱法 散射光谱分析技术：比浊法

分光光度技术的基本原理 (一)吸光度与透光度 当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光 被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光 强度为10，透射光强度为1，和o之比称为透光度，即： T=1/1o T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度 即： A =-IgT =-IgI/Io=Iglo/I

6 一、分光光度技术的基本原理 （一）吸光度与透光度 A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I 当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光 被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光 强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度，即： T = I/I0 T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度 即：

(二)Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其 表达式为： A=KLC (Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。) 式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液 层厚度，称为光径；C为溶液浓度

7 （二）Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其 表达式为： A = KLC 式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液 层厚度，称为光径；C为溶液浓度 （Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。）

据Lambert-Beer定律，当液层厚度为 cm,浓度单位为mol/L时，吸光系数K称 为摩尔吸光系数(E)。的意义是：当液层厚 度为1cm,物质浓度为1mol/儿时在特定波 长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数

8 据Lambert-Beer定律，当液层厚度为 cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称 为摩尔吸光系数(ε)。ε的意义是：当液层厚 度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波 长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数

三)偏离Lambert-Beer定律的因素 应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学 和化学两方面的因素。 1.光学因素： 要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。 2.化学因素： 浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡

9 （三）偏离Lambert-Beer定律的因素 应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学 和化学两方面的因素。 1．光学因素： 要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。 2．化学因素： 浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡

二、分光光度计的基本结构 最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计 ■结构： 五大部份 光源→单色器一比色杯→检测器一显示器 10

10 二、分光光度计的基本结构 最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计 光源 单色器 比色杯 检测器 显示器 五大部份 ◼结构：