《临床检验仪器学》课程教学资源（实验指导）实验9 紫外可见分光光度计的性能测试

实验9紫外可见分光光度计的性能测试 实验目的 1.了解紫外可见分光光度计的基本原理与结构 2。掌握紫外可见分光光度计的基本操作方法。 3.熟悉波长校正及检定吸光度准确性的方法。 4.熟悉杂散光的检查。 实验器材 紫外可见分光光度计一台，石英比色杯2个，10ml容量瓶6个，1.00%(gml 碘化钠溶液，5.00%(gml)亚硝酸钠溶液，标定的重铬酸钾溶液（约0.06gL。 硫酸溶液0.005molL) 实验原理 根据朗伯-比尔定律A=ECL,在一定条件下，吸收度与溶液的浓度及液层 厚度成正比，在溶液吸收曲线的峰值处这种关系最明显。 紫外分光光度计可在一定波长范围内扫描出溶液的吸收光谱图，并且确定其 最大吸收波长值。在最大波长值下测定己知吸收系数的溶液的吸收值，通过计算 此溶液的吸收系数并与标准值比较，可以对比其准确性。 由于温度变化对紫外可见分光光度计机械部分的影响，仪器的波长经常会有 变动，所以除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正波长 实验步骤 一、波长校正 1.自动检测法 (I)开机双击电脑桌面上的Uvprobe,展示光谱模块(the Spectrum module): (2)点击Connect,机器与电脑连接并自动完成自检后，再点击OK。 (3)在左下方光度计键钮栏点击Baseline,波长选择：900-190nm,完成 基线校正。(4)确定仪器操作条件波长：900-190nm:扫描速度：中速： 取值间隔：lnm:扫描模式：单一：测量模式：吸收度：狭缝宽度：2nm: 光源改变波长：360nm

实验 9 紫外可见分光光度计的性能测试 实验目的 1. 了解紫外可见分光光度计的基本原理与结构。 2. 掌握紫外可见分光光度计的基本操作方法。 3. 熟悉波长校正及检定吸光度准确性的方法。 4. 熟悉杂散光的检查。 实验器材 紫外可见分光光度计一台，石英比色杯 2 个，10ml 容量瓶 6 个，1.00%(g/ml) 碘化钠溶液，5.00%（g/ml）亚硝酸钠溶液，标定的重铬酸钾溶液（约 0.06g/L, 硫酸溶液 0.005mol/L） 实验原理 根据朗伯-比尔定律 A = ECL ，在一定条件下，吸收度与溶液的浓度及液层 厚度成正比，在溶液吸收曲线的峰值处这种关系最明显。 紫外分光光度计可在一定波长范围内扫描出溶液的吸收光谱图，并且确定其 最大吸收波长值。在最大波长值下测定已知吸收系数的溶液的吸收值，通过计算 此溶液的吸收系数并与标准值比较，可以对比其准确性。 由于温度变化对紫外可见分光光度计机械部分的影响，仪器的波长经常会有 变动，所以除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正波长。 实验步骤 一、波长校正 1．自动检测法 （1）开机 双击电脑桌面上的 Uvprobe，展示光谱模块（the Spectrum module）； （2）点击 Connect，机器与电脑连接并自动完成自检后，再点击 OK。 （3）在左下方光度计键钮栏点击 Baseline, 波长选择：900~190nm， 完成 基线校正。（4）确定仪器操作条件 波长：900-190nm；扫描速度：中速； 取值间隔：1nm；扫描模式：单一；测量模式：吸收度；狭缝宽度：2nm； 光源改变波长：360nm

2.标准滤光片法将钛玻璃片置于样品池，点击Stat开始扫描吸收曲线， 观察曲线中在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm 536.2m,与637.5nm是否有尖锐吸收峰，作波长校正。钛玻璃因来源不同会有微 小的差别。 二、吸光度准确度测定 将0.005moL稀硫酸倒入石英比色杯中作空白对照，标定的重铬酸钾的硫 酸液置于样品池中，按Stat键进行扫描，在吸收曲线中查找257nm、350nm的 最大吸收和235nm、313nm处的最小吸收，根据E%1em=A/CL计算吸收系数，与 己知吸收系数比较(235nm:124.5:313nm:48.62:257nm:144.0:350nm:106.6) 检定其吸收准确度。 三、杂散光的检查 1.测定1.00%(gml)碘化钠溶液在220nm处透光率，应<0.8%： 2.测定5.00%亚硝酸钠溶液在340nm处透光率，应<0.8%。 数据记录及处理 表91波长准确度校正 测定位 标准值 误差 表92吸光度准确度校正 测定值 理论值 误索 表93杂散光检查

2．标准滤光片法 将钛玻璃片置于样品池，点击 Start 开始扫描吸收曲线， 观察曲线中在 279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、 536.2m, 与 637.5nm 是否有尖锐吸收峰，作波长校正。钛玻璃因来源不同会有微 小的差别。 二、吸光度准确度测定 将 0.005mol/L 稀硫酸倒入石英比色杯中作空白对照，标定的重铬酸钾的硫 酸液置于样品池中，按 Start 键进行扫描，在吸收曲线中查找 257nm、350nm 的 最大吸收和 235nm、313nm 处的最小吸收，根据 E 1%1cm=A/CL 计算吸收系数，与 已知吸收系数比较（235nm：124.5；313nm：48.62；257nm：144.0；350nm：106.6）, 检定其吸收准确度。 三、杂散光的检查 1．测定 1.00%（g/ml）碘化钠溶液在 220nm 处透光率，应<0.8%； 2．测定 5.00%亚硝酸钠溶液在 340nm 处透光率，应<0.8%。 数据记录及处理 表 9-1 波长准确度校正 测定值 标准值 误差 表 9-2 吸光度准确度校正 测定值 理论值 误差 表 9-3 杂散光检查

测定波长 测定溶液 杂散光值 思考题 1.常用的波长准确度校正有几种方法，简述其优缺点。 2.光度准确度校正有何重要意义？ 3.杂散光对测定有何影响？

测定波长 测定溶液 杂散光值 思考题 1．常用的波长准确度校正有几种方法，简述其优缺点。 2．光度准确度校正有何重要意义？ 3．杂散光对测定有何影响？