动物科学实践教学资源（实验指导）巴氏杆菌病的实验室诊断

技能训练巴氏杆菌病的实验室诊断一目的掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断方法。二内容及方法1.检验材料采集新鲜的待检实质器官：肝、脾、肾、肺脏等器官和心血等材料，再进行如下项目实验。12.镜检取病料涂数片，分别进行美兰、革兰氏、姬姆萨等染色，然后镜检。多杀性巴氏杆菌呈卵圆形（或球杆状），两极浓染。血液涂片用瑞氏或姬姆萨氏染色时，细菌被染成蓝色或淡青色，红细胞染成淡红色。3.培养将病料分别接种于鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤于37℃进行培养。多杀性巴氏杆菌在鲜血琼脂上长出较平坦、李透明的露滴样菌落，不溶血：在血清琼脂上生长旺盛。在45℃折射光线下镜检，可见不同色泽的荧光，如Fg型的菌落呈现蓝绿色而带金光，边缘有狭窄的红黄光带：Fo型的菌落较大，有水样湿润感，荧光桔红色而带金光，边缘有乳白色光带。在普通肉汤中呈均匀混浊，以后便有沉淀，振摇时沉淀物呈瓣状升起。当分得纯培养后，可由培养物做涂片检查（在由培养基上的培养物所做的涂片中，大部分多杀性巴氏杆菌不表现两极染色特性，而常呈球杆状或双球状）。观察其形态、染色特性（革兰氏染色、荧光性、培养特性）。同时做生理生化鉴定。本菌的主要生理生化特性见表2表2多杀性巴氏杆菌的主要生化特性硫化葡萄甘露麦糠凯琼靛基庶糖卫予肥糖鼠李菊糖血琼脂溶糖糖血质氢醇脂生长一+-1+ATATAA-一4.动物试验无菌环境下取病料，剪碎、研磨、用灭菌生理盐水稀释成1:5～1:10乳剂，接种于实验动物皮下或肌肉，剂量为0.2～0.5ml。猪、牛、羊等家畜的病料可接种小鼠或家免：禽类的病料可接种鸽、鸡或小鼠。可以用激发试验判明家兔是否带菌，即在3d之内，每天给受检家免鼻腔内注入0.2%~0.5%煌绿水溶液0.2ml。如家免带菌，则在注入药物后18～24h即出现化脓性鼻炎不带菌的家免，对激发试验毫无反应，或仅发现暂时性、微弱的浆液性鼻分泌物。实验动物如于接种后18～24h左右死亡，则采取心血及实质脏器做涂片检查，分离培养，然后再对病死动物户体进行剖检并观察病理变化。接种局部可见肌肉及皮下组织发生水肿和发炎灶：胸腔和心包有浆液性纤维素性渗出往返，心外膜有多数出血点：淋巴结水肿并增大：肝脏淤血（如接种鸡尚可见有密布的针尖至针头大灰白色小坏死灶）

技能训练九 巴氏杆菌病的实验室诊断 一 目的 掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断方法。 二 内容及方法 1．检验材料 采集新鲜的待检实质器官：肝、脾、肾、肺脏等器官和心血等材料，再进行如下项目实 验。 ]2．镜检 取病料涂数片，分别进行美兰、革兰氏、姬姆萨等染色，然后镜检。多杀性巴氏杆菌呈 卵圆形（或球杆状），两极浓染。血液涂片用瑞氏或姬姆萨氏染色时，细菌被染成蓝色或淡 青色，红细胞染成淡红色。 3．培养 将病料分别接种于鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤于 37℃进行培养。多杀性巴氏杆菌 在鲜血琼脂上长出较平坦、李透明的露滴样菌落，不溶血；在血清琼脂上生长旺盛。在 45℃ 折射光线下镜检，可见不同色泽的荧光，如 Fg 型的菌落呈现蓝绿色而带金光，边缘有狭窄 的红黄光带；Fo 型的菌落较大，有水样湿润感，荧光桔红色而带金光，边缘有乳白色光带。 在普通肉汤中呈均匀混浊，以后便有沉淀，振摇时沉淀物呈瓣状升起。 当分得纯培养后，可由培养物做涂片检查（在由培养基上的培养物所做的涂片中，大部 分多杀性巴氏杆菌不表现两极染色特性，而常呈球杆状或双球状）。观察其形态、染色特性 （革兰氏染色、荧光性、培养特性）。同时做生理生化鉴定。本菌的主要生理生化特性见表 2 表 2 多杀性巴氏杆菌的主要生化特性 血琼脂溶 血 麦糠凯琼 脂生 长 靛 基 质 硫 化 氢 葡 萄 糖 甘 露 醇 庶糖 卫 予 醇 肥糖 鼠 李 糖 菊糖 — — ＋ ＋ A A A A — — — 4．动物试验 无菌环境下取病料，剪碎、研磨、用灭菌生理盐水稀释成 1: 5～1: 10 乳剂，接种于实验 动物皮下或肌肉，剂量为 0.2～0.5 ml。猪、牛、羊等家畜的病料可接种小鼠或家兔；禽类的 病料可接种鸽、鸡或小鼠。 可以用激发试验判明家兔是否带菌，即在 3d 之内，每天给受检家兔鼻腔内注入 0.2%～ 0.5%煌绿水溶液 0.2ml。如家兔带菌，则在注入药物后 18～24h 即出现化脓性鼻炎不带菌的 家兔，对激发试验毫无反应，或仅发现暂时性、微弱的浆液性鼻分泌物。 实验动物如于接种后 18～24h 左右死亡，则采取心血及实质脏器做涂片检查，分离培 养，然后再对病死动物尸体进行剖检并观察病理变化。接种局部可见肌肉及皮下组织发生水 肿和发炎灶：胸腔和心包有浆液性纤维素性渗出往返，心外膜有多数出血点；淋巴结水肿并 增大；肝脏淤血（如接种鸡尚可见有密布的针尖至针头大灰白色小坏死灶）

动物巴氏杆菌病常与其他疾病并发，或继发于其他疾病。所以，用微生物学方法鉴定出病料中有多杀性巴氏杆菌后，还应注意有无其他疾病存在，尤其是要注意检查猪瘟、鸡新城疫、小鹅瘟、免出血症等严重危害相应动物的传染病。考核标准优秀能熟练掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接种方法者为优秀。良好能掌握鸡巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、普通肉汤培养的方法，接种方法者为良好。及格能基本掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接种方法者为及格。不及格不能掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接种方法者为不及格。复习题与作业简述动物巴氏杆菌病的微生物学诊断程序

动物巴氏杆菌病常与其他疾病并发，或继发于其他疾病。所以，用微生物学方法鉴定出 病料中有多杀性巴氏杆菌后，还应注意有无其他疾病存在，尤其是要注意检查猪瘟、鸡新城 疫、小鹅瘟、兔出血症等严重危害相应动物的传染病。 考核标准 优秀 能熟练掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接 种方法者为优秀。 良好 能掌握鸡巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、普通肉汤培养的方法，接种方法者为良 好。 及格 能基本掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接 种方法者为及格。 不及格 不能掌握巴氏杆菌病镜检，鲜血琼脂、血清琼脂、普通肉汤培养的方法，接 种方法者为不及格。 复习题与作业 简述动物巴氏杆菌病的微生物学诊断程序