动物科学实践教学资源（实验指导）洛克氏液琼脂双相培养基的制作

洛克氏液琼脂培养基的制作（培养阿米巴原虫）：1.固体部分牛肝浸膏3.5g，蛋白陈5.5g，琼脂粉15g，洛克氏液1000ml。2.洛克氏液成分氯化钠8g，氯化钾0.2g，氯化钙0.2g，氯化镁0.01g，磷酸氢二钠2g，磷酸二氢钾0.3g，蒸馏水1000ml。3.操作方法：接种前在每培养管内加入洛克氏液34ml，灭活小牛血清0.5ml，消毒米粉少许，青链霉素各3000～5000单位，最后加入虫种1～2滴即可。4.所需物品及具体配制步骤1）准备蒸馏水3000～5000ml；2000ml和1000ml三角烧瓶各1个；2）取蒸馏水2000ml，将1500ml放入2000ml的三角烧瓶内，加入氯化钠16g、氯化钾0.4g、磷酸氢二钠4g、磷酸二氢钾0.6g；将另500ml蒸馏水分装在已备的2个250ml的三角烧瓶内：3）取称量瓶2个，1个放入氯化镁0.02g，另一个放入氯化镁0.4g；再取2个500ml的盐水瓶，2个或3个100ml的三角烧瓶，待消毒。4）将以上物品放入高压消毒炉内，经15磅，20分钟高压灭菌后，取出待所有液体冷却后，分别将称量瓶中的氯化镁和氯化钙溶解在以上2个250ml的三角烧瓶内，先将溶解的氯化镁溶液加入盛有1500ml水的三角烧瓶内，然后再将溶解的氯化钙溶液缓慢加入其中，即配制成2000ml经过消毒灭菌的洛克氏液。5）配制固体部分①取洛克氏液1000ml，加入牛肝浸膏3.5g，蛋白陈5.5g，琼脂粉15g（或琼脂18g），经沸水浴使其完全溶化，趁热分装在已备的试管内，每管4～5ml。②将分装好的试管经高压灭菌（15磅20分钟），取出后趁热放木条上制成斜面，冷却后放入冰箱内储存备用。5.注意事项1）剩余的洛克氏液与培养基管放置在4℃冰箱保存：2）切记加氯化钙时，必须缓慢加入或滴入，最好在25℃以下操作

洛克氏液琼脂培养基的制作（培养阿米巴原虫）： 1.固体部分 牛肝浸膏 3.5ｇ，蛋白胨 5.5ｇ，琼脂粉 15ｇ，洛克氏液 1000ml。 2.洛克氏液成分 氯化钠 8ｇ，氯化钾 0.2ｇ，氯化钙 0.2ｇ，氯化镁 0.01ｇ，磷酸氢二钠 2ｇ，磷酸二氢钾 0.3ｇ，蒸馏水 1000ml。 3.操作方法：接种前在每培养管内加入洛克氏液 3～4ml，灭活小牛血清 0.5ml，消毒米粉 少许，青链霉素各 3000～5000 单位，最后加入虫种 1～2 滴即可。 4.所需物品及具体配制步骤 1) 准备蒸馏水 3000～5000ml； 2000ml 和 1000ml 三角烧瓶各 1 个； 2）取蒸馏水 2000 ml，将 1500ml 放入 2000ml 的三角烧瓶内，加入氯化钠 16g、氯化钾 0.4g、磷酸氢二钠 4g、磷酸二氢钾 0.6g；将另 500 ml 蒸馏水分装在已备的 2 个 250 ml 的三 角烧瓶内； 3）取称量瓶 2 个，1 个放入氯化镁 0.02g，另一个放入氯化镁 0.4g；再取 2 个 500ml 的盐 水瓶，2 个或 3 个 100 ml 的三角烧瓶，待消毒。 4）将以上物品放入高压消毒炉内，经 15 磅，20 分钟高压灭菌后，取出待所有液体冷却 后，分别将称量瓶中的氯化镁和氯化钙溶解在以上 2 个 250 ml 的三角烧瓶内，先将溶解的 氯化镁溶液加入盛有 1500ml 水的三角烧瓶内，然后再将溶解的氯化钙溶液缓慢加入其中， 即配制成 2000ml 经过消毒灭菌的洛克氏液。 5）配制固体部分 ①取洛克氏液 1000ml，加入牛肝浸膏 3.5g， 蛋白胨 5.5g，琼脂粉 15g（或琼脂 18g），经 沸水浴使其完全溶化，趁热分装在已备的试管内，每管 4～5 ml。 ②将分装好的试管经高压灭菌（15 磅 20 分钟），取出后趁热放木条上制成斜面，冷却后 放入冰箱内储存备用。 5.注意事项 1）剩余的洛克氏液与培养基管放置在 4℃冰箱保存； 2）切记加氯化钙时，必须缓慢加入或滴入，最好在 25℃以下操作