《兽医临床诊断学》课程教学资源（参考资料）常用培养基的制备

常用培养基的制备 培养基是用人工方法按照微生物的生长需要，制成的一种营养物制品。其主要用途是对微 生物进行分离培养、传代保存与鉴别以及研究微生物的生理生化特性：制造菌苗、疫苗或生物 制品等。所以培养微生物的培养基必须符合微生物的生长繁殖要求，否则微生物在该培养基中 是不生长的。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养 基等。 (一)基础培养基的制备 1.牛肉水成分：瘦牛肉500g:常水1000mL。方法：除去瘦牛肉的脂肪、腱膜，切成小 块，用绞肉机绞碎。秤其重量，加倍量水，浸泡一夜（夏天防止腐败可省去）。煮沸1，在加 热煮沸中间，须多次搅拌。用白粗布滤去肉渣，并挤出内渣中的残存肉水。滤下的肉水再用滤 纸滤过一次。计量体积，以常水补足到原来的量，分装于烧瓶内，置高压蒸气锅内以121℃灭 菌20~30min后，放冷暗处保存。如用牛肉膏制备肉水时，可往1000mL蒸馏水中加3g牛肉膏， 溶化后即可。用途：制造各种培养基的基础。 2.普通肉汤成分：牛肉水1000mL:蛋白胨10g:氯化钠5g。方法：①取一定量牛肉水 加入蛋白胨和氯化钠后，放流通蒸气锅内加温溶解30min。②用0.1mol/L和1mol/L的氢氧化 钠、0.1mol/L和1mol/L的盐酸溶液修正pH至7.4~7.6（每1000mL加2 N NaOH液约12~15m L)。③放流通蒸气锅内加热30mi,使碱溶解，并析出沉淀物。④用滤纸过滤，滤过后的肉 汤必须完全透明，分装于试管的1/3处。⑤置高压蒸气锅内，以121℃灭茵20~30min。用途： ①用作细菌的液体培养。②检查细菌的发育状况，以及观察细菌形成沉淀物、菌膜、菌环等的 情况。 3.普通琼脂成分：牛肉水1000mL:蛋白胨10g:氯化钠5g:琼脂20~30g。方法：①取 一定量牛肉水，加入蛋白胨和氯化钠后，放流通蒸气锅内加温30min,修正PH为7.4~7.6，再 置流通蒸气锅内加热30min,用滤纸滤过。②加入一定量的琼脂，在室温以37℃时成为固体， 便于生长成菌落和分离细菌纯种。琼脂呈酸性，故用其制造培养基时，需用碱液修正成弱碱 性，置流通热气锅内加温溶解。③分装于试管内或三角瓶中，置高压蒸气锅内，以121℃灭 菌20mi。如作菌种传代、纯培养时，可放成斜面，如用其分离培养时，可做成平板。用途： ①细菌的分离培养、纯培养、观察菌落的性状及保存茵种用。②制造特殊培养基的基础。 (二)常用特殊培养基的制备 1.血液琼脂成分：脱纤血液（无菌）5~10mL:普通琼脂100mL。方法：取制备的普通琼 脂，溶解后冷至50℃左右，按以上数量加入无菌的脱纤维血液（马血、羊血或家兔血均可）， 混合后做成斜面或平板。使用前须作无菌检验。用途：①某些病原菌（如马腺疫链球菌、巴 氏杆菌等)的分离培养。②观察细菌的溶血现象，作鉴别用。③斜面常用于保存要求营养高的 菌种。 2.SS琼脂成份：基础培养基1000mL:乳糖10g:柠檬酸钠8.5g:硫代硫酸钠8.5g:10%柠 檬酸铁溶液10mL:1%中性红溶液2.5mL:0.1%煌绿溶液0.22mL。方法：加热溶化培养基， 按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正H7.O,加入中性红和煌绿溶液， 倾注平板。注意事项：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48小时内使用。②煌绿

常用培养基的制备 培养基是用人工方法按照微生物的生长需要，制成的一种营养物制品。其主要用途是对微 生物进行分离培养、传代保存与鉴别以及研究微生物的生理生化特性；制造菌苗、疫苗或生物 制品等。所以培养微生物的培养基必须符合微生物的生长繁殖要求，否则微生物在该培养基中 是不生长的。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养 基等。 （一）基础培养基的制备 1.牛肉水 成分：瘦牛肉 500g；常水 1000mL。方法：除去瘦牛肉的脂肪、腱膜，切成小 块，用绞肉机绞碎。秤其重量，加倍量水，浸泡一夜（夏天防止腐败可省去）。煮沸1h，在加 热煮沸中间，须多次搅拌。用白粗布滤去肉渣，并挤出内渣中的残存肉水。滤下的肉水再用滤 纸滤过一次。计量体积，以常水补足到原来的量，分装于烧瓶内，置高压蒸气锅内以121℃灭 菌20～30min后，放冷暗处保存。如用牛肉膏制备肉水时，可往1000mL蒸馏水中加3g牛肉膏， 溶化后即可。用途：制造各种培养基的基础。 2.普通肉汤 成分：牛肉水1000mL；蛋白胨 10g；氯化钠 5g。方法：①取一定量牛肉水， 加入蛋白胨和氯化钠后，放流通蒸气锅内加温溶解30min。②用 0.1mol/L和1mol/L的氢氧化 钠、0.1mol/L和1mol/L的盐酸溶液修正pH至7.4～7.6（每1000mL加2N NaOH液约12～15m L）。③放流通蒸气锅内加热30min，使碱溶解，并析出沉淀物。④用滤纸过滤，滤过后的肉 汤必须完全透明，分装于试管的1/3处。⑤置高压蒸气锅内，以121℃灭菌20～30min。用途： ①用作细菌的液体培养。②检查细菌的发育状况，以及观察细菌形成沉淀物、菌膜、菌环等的 情况。 3.普通琼脂 成分：牛肉水1000mL；蛋白胨 l0g；氯化钠 5g；琼脂 20～30g。方法：①取 —定量牛肉水，加入蛋白胨和氯化钠后，放流通蒸气锅内加温30min，修正PH为7.4～7.6，再 置流通蒸气锅内加热30min，用滤纸滤过。②加入一定量的琼脂，在室温以37℃时成为固体， 便于生长成菌落和分离细菌纯种。琼脂呈酸性，故用其制造培养基时，需用碱液修正成弱碱 性，置流通热气锅内加温溶解。 ③分装于试管内或三角瓶中，置高压蒸气锅内，以121℃灭 菌20min。如作菌种传代、纯培养时，可放成斜面，如用其分离培养时，可做成平板。用途： ①细菌的分离培养、纯培养、观察菌落的性状及保存菌种用。②制造特殊培养基的基础。 （二）常用特殊培养基的制备 1.血液琼脂 成分：脱纤血液（无菌）5～10mL；普通琼脂100mL。方法：取制备的普通琼 脂，溶解后冷至50℃左右，按以上数量加入无菌的脱纤维血液（马血、羊血或家兔血均可）， 混合后做成斜面或平板。使用前须作无菌检验。用途： ①某些病原菌（如马腺疫链球菌、巴 氏杆菌等）的分离培养。②观察细菌的溶血现象，作鉴别用。③斜面常用于保存要求营养高的 菌种。 2. SS琼脂 成份：基础培养基1000mL；乳糖10g；柠檬酸钠8.5g；硫代硫酸钠8.5g；10％柠 檬酸铁溶液10mL ；1％中性红溶液2.5mL；0.1％煌绿溶液0.22mL。方法：加热溶化培养基， 按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正pH7．0，加入中性红和煌绿溶液， 倾注平板。注意事项：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48小时内使用。②煌绿

溶液配好后应在10天以内使用。③可以购用SS琼脂的干燥培养基。用途：用于沙门氏菌、志 贺氏菌的选择性分离培养。 3.麦康凯琼脂成份：蛋白胨17g:肘胨3g:猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g;氯化钠5g:琼 脂17g;乳糖10g:0.01%结晶紫水溶液10mL:0.5%中性红水溶液5mL:蒸馏水1000mL。方 法：将蛋白胨、肘胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正至pH7.2。将琼脂加入于600 L蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高灭菌15分钟备用。临用时加热 溶化琼脂，趁热加入乳糖。冷至50~55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。用途：临床用于分离肠细菌。此培养基可抑制革 兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌，巴斯德氏 菌不能生长。 4.伊红美蓝琼脂(EMB)成份：蛋白胨10g:乳糖10g:磷酸氢二钾2g:琼脂17g:2%伊 红y溶液20mL:0.65%美蓝溶液10mL:蒸馏水1000mL。方法法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂 溶解于蒸馏水中，校正pH7.1,分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15分钟备用。临用时加入乳糖 并加热溶化琼脂，冷却至5055℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。用途：用于革兰 氏阴性肠道菌的分离和鉴别。大肠杆菌在EMB上发酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金属光 泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长

溶液配好后应在10天以内使用。③可以购用SS琼脂的干燥培养基。用途：用于沙门氏菌、志 贺氏菌的选择性分离培养。 3. 麦康凯琼脂 成份：蛋白胨17g；肘胨3g；猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g ；氯化钠5g；琼 脂17g ；乳糖10g ； 0.01％结晶紫水溶液10mL；0.5％中性红水溶液5mL；蒸馏水1000mL。方 法：将蛋白胨、肘胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正至pH7.2。将琼脂加入于600 mL蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高灭菌15分钟备用。临用时加热 溶化琼脂，趁热加入乳糖。冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。用途：临床用于分离肠细菌。此培养基可抑制革 兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌，巴斯德氏 菌不能生长。 4. 伊红美蓝琼脂（EMB） 成份：蛋白胨10g ；乳糖10g；磷酸氢二钾2g；琼脂17g；2％伊 红y溶液20mL；0．65％美蓝溶液10mL；蒸馏水1000mL。方法法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂 溶解于蒸馏水中，校正pH7．1，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15分钟备用。临用时加入乳糖 并加热溶化琼脂，冷却至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。用途：用于革兰 氏阴性肠道菌的分离和鉴别。大肠杆菌在 EMB 上发酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金属光 泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长