安徽医科大学基础医学院：《生物化学》课程教学资源（PPT课件讲稿）第21章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy

第二十一章 基因诊晰与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy

第二十一章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy

基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常 外源基因的入侵

基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常 外源基因的入侵

第一节基因诊断 >概念和特点 >基因诊断的常用技术方法 基因诊断的应用

第一节 基因诊断 ➢概念和特点 ➢基因诊断的常用技术方法 ➢基因诊断的应用

基因诊断的概念和特点 概念 利用现代分子生物学和分子遗 传学的技术方法，直接检测基因 结构及其表达水平是否正常，从 而对疾病作出诊断的方法

一、基因诊断的概念和特点 概念 利用现代分子生物学和分子遗 传学的技术方法，直接检测基因 结构及其表达水平是否正常，从 而对疾病作出诊断的方法

特点 >针对性强 >特异性高 >灵敏度高 >适用性强，诊断范围广

特点 ➢针对性强 ➢特异性高 ➢灵敏度高 ➢适用性强，诊断范围广

二、基因诊断的常用技术方法 >核酸分子杂交技术 1.限制性内切酶酶谱分析法 2.DNA限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP 析 3.等位基因特异寡核苷酸探针（allele specific oligonucleotide,ASO)杂交法 >聚合酶链反应(PCR) >基因测序 > 基因芯片

二、基因诊断的常用技术方法 ➢ 核酸分子杂交技术 1.限制性内切酶酶谱分析法 2.DNA 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 （ restriction fragment length polymorphism，RFLP）分 析 3.等位基因特异寡核苷酸探针（allele specific oligonucleotide，ASO）杂交法 ➢ 聚合酶链反应（PCR） ➢ 基因测序 ➢ 基因芯片

(一)核酸分子杂交技术 来源不同、具有互补碱基序列的核酸 (DNA或RNA)单链在适宜条件下互补配 对形成杂化双链结构 选用已知顺序片段作为探针，经放射性同位 素或非放射性物质标记后，再与未知的目的 核酸链进行杂交反应。 分离已杂交和未杂交的标记核酸片段，通过 标记信号的检测对未知的目的核酸链进行定 性、定量分析

（一）核酸分子杂交技术 • 来源不同、具有互补碱基序列的核酸 （DNA或RNA）单链在适宜条件下互补配 对形成杂化双链结构。 • 选用已知顺序片段作为探针，经放射性同位 素或非放射性物质标记后，再与未知的目的 核酸链进行杂交反应。 • 分离已杂交和未杂交的标记核酸片段，通过 标记信号的检测对未知的目的核酸链进行定 性、定量分析

镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) ■ 5 1.15kb 正常基因 1.35kb 突变基因

× MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5´ 3´ 正常基因 5´ 3´ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析

镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 1.35kb 1.15kb 0.2kb 正常人 突变携带着 患者

+ ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析

RLFP分析法 a ) HindⅢ酶切染色体DNA 凝胶电泳分析酶切片段 1 2 3 2 3① AAGCTT AAGCTT TTCGAA TTCGAIA 切点 切点 2 2 AAGCTT AGGCTT TTCGAA TCCGAA 长片段 短片段 切点 DNA DNA

RLFP分析法