华中科技大学：《仪器分析实验》课程教学资源（教案讲义）二氯荧光素量子产率的测定

二氯荧光素量子产率的测定一、实验目的1、了解荧光分析法及测量荧光物质的荧光量子产率的基本原理。2、掌握二氯荧光素量子产率的测量方法和相关影响因素。二、方法原理荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料的制备已成为这些领域的研究热点与前沿，而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它们的性能优劣。荧光量子产率（YE）即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小于1。YF的数值越大则化合物的荧光越强，而无荧光的物质的荧光量子产率却等于或非常接近于零。荧光量子产率一般采用参比法测定。即在相同激发条件下，分别测定待测荧光试样和已知量子产率的参比荧光标准物质两种稀溶液的积分荧光强度（即校正荧光光谱所包括的面积）以及对一相同激发波长的入射光（紫外-可见光）的吸光度，再将这些值分别代入特定公式进行计算，就可获得待测荧光试样的量子产率：YYu、Ys一待测物质和参比标准物质的荧光量子产率；Fu、Fs一为待测物质和参比物质的积分荧光强度：Au、As一为待测物质和参比物质在该激发波长的入射光的吸光度（A=εbc)。运用此公式时一般要求吸光度As、Au低于0.05。参比标准样最好选择其激发波长值相近的荧光物质。有分析应用价值的荧光化合物的Yu一般常在0.1-1之间。三、仪器和试剂1、分子荧光光谱仪：紫外一可见分光光度计；2、二氯荧光素（5.0μgmL-）待测试样溶液（含1.0mol-L-NaOH水溶液)；罗丹明B（5.0μg·mL-"）参比标准溶液（溶剂为无水乙醇）；3、荧光比色皿一个，紫外石英比色血一对：10mL具塞比色管、移液管。四、实验步骤1、移取所需浓度的二氯荧光素与罗丹明B溶液，用相应溶剂稀释至10.0mL（A505nm<0.05)，在紫外一可见分光光度计上测定其吸收光谱曲线；分别测定它们在505nm处的吸光度。2、移取上述相同的溶液于荧光比色血中，在荧光仪上分别扫描其荧光激发光谱及发射光谱：分别测定它们以505nm为激发波长时的荧光发射光谱。五、结果处理1、计算二氯荧光素和标准物质罗丹明B的荧光光谱的相对积分面积。2、从相关资料查阅参比标准物质罗丹明B在乙醇溶剂中的量子产率。3、将所获得的各相关数据代入荧光量子产率计算公式计算二氯荧光素溶液的量子产率数值。六、注意事项1、如何测定某物质的荧光激发光谱与发射光谱曲线？2、测量某荧光物质的荧光量子产率时，如何选择荧光参比标准物质，它的作用是什么？

二氯荧光素量子产率的测定 一、实验目的 1、了解荧光分析法及测量荧光物质的荧光量子产率的基本原理。 2、掌握二氯荧光素量子产率的测量方法和相关影响因素。 二、方法原理 荧光分析法在有机电致发光、生物医药、临床诊断等领域得到广泛应用。高性能荧光材料 的制备已成为这些领域的研究热点与前沿，而这些荧光材料的荧光量子产率的高低直接影响它 们的性能优劣。荧光量子产率（YF）即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发 光的光子数之比值。它的数值在通常情况下总是小于 1。YF 的数值越大则化合物的荧光越强， 而无荧光的物质的荧光量子产率却等于或非常接近于零。 荧光量子产率一般采用参比法测定。即在相同激发条件下，分别测定待测荧光试样和已知 量子产率的参比荧光标准物质两种稀溶液的积分荧光强度（即校正荧光光谱所包括的面积）以 及对一相同激发波长的入射光（紫外-可见光）的吸光度，再将这些值分别代入特定公式进行计 算，就可获得待测荧光试样的量子产率： Yu = Ys · Fs Fu · Au As Yu、Ys —待测物质和参比标准物质的荧光量子产率； Fu、Fs —为待测物质和参比物质的积分荧光强度； Au、As —为待测物质和参比物质在该激发波长的入射光的吸光度（A=εbc）。 运用此公式时一般要求吸光度 As、Au 低于 0.05。参比标准样最好选择其激发波长值相近 的荧光物质。有分析应用价值的荧光化合物的 Yu 一般常在 0.1-1 之间。 三、仪器和试剂 1、分子荧光光谱仪；紫外－可见分光光度计； 2、二氯荧光素（5.0μg·mL-1）待测试样溶液(含 1.0mol·L -1 NaOH 水溶液)；罗丹明 B（5.0 μg·mL-1）参比标准溶液（溶剂为无水乙醇）； 3、荧光比色皿一个，紫外石英比色皿一对；10 mL 具塞比色管、移液管。 四、实验步骤 1、移取所需浓度的二氯荧光素与罗丹明B溶液，用相应溶剂稀释至10.0 mL（A505nm<0.05）， 在紫外－可见分光光度计上测定其吸收光谱曲线；分别测定它们在 505 nm 处的吸光度。 2、移取上述相同的溶液于荧光比色皿中，在荧光仪上分别扫描其荧光激发光谱及发射光 谱；分别测定它们以 505 nm 为激发波长时的荧光发射光谱。 五、结果处理 1、计算二氯荧光素和标准物质罗丹明 B 的荧光光谱的相对积分面积。 2、从相关资料查阅参比标准物质罗丹明 B 在乙醇溶剂中的量子产率。 3、将所获得的各相关数据代入荧光量子产率计算公式计算二氯荧光素溶液的量子产率数 值。 六、注意事项 1、如何测定某物质的荧光激发光谱与发射光谱曲线？ 2、测量某荧光物质的荧光量子产率时，如何选择荧光参比标准物质，它的作用是什么？

3、吸光度的测定与测定荧光光谱的面积时的激发波长为什么要一致？4、为什么要求待测物质与荧光参比溶液均为稀溶液？稀至何种程度？

3、吸光度的测定与测定荧光光谱的面积时的激发波长为什么要一致？ 4、为什么要求待测物质与荧光参比溶液均为稀溶液？稀至何种程度？