《食源性人畜共患病》课程实验指导书

食源性人畜共患病实验指导书二〇一八年九月

食源性人畜共患病 实验指导书 二○一八年九月

实验一、常见食源性人畜共患寄生虫形态观察一、实验目的通过观察课堂讲解的常见食源性寄生虫的形态，加深学生对课堂讲解知识的印象，使学生对常见食源性寄生虫有一个真实而直观的认识。二、设备及仪器常见食源性寄生虫玻片（虫卵、成虫）、常见食源性寄生虫成虫（成虫感染人体组织、器官）的浸制标本、普通光学显微镜。三、实验主要内容（1）观察几种肉眼可见食源性寄生虫浸制标本；(2）显微镜下观察几种常见食源性寄生原虫切片标本：(3）观察几种食源性寄生虫感染人组织（器官）的浸制标本；四、观察内容(一) 玻片（1）受精蝴虫卵；（2）未受精虫卵；（3）布氏姜片吸虫虫卵；（4）华支睾吸虫虫卵；（5）卫氏并殖吸虫虫卵；（6）鞭虫虫卵；（7）弓形虫包囊：（8）华支睾吸虫囊；（9）阿米巴原虫包囊；（10）猪带终虫成节；（11）猪带终虫孕节；（12）旋毛虫囊包：（13）隐孢子虫卵囊：（14）华支睾吸虫成虫。（二）浸制标本1

1 实验一、常见食源性人畜共患寄生虫形态观察 一、实验目的 通过观察课堂讲解的常见食源性寄生虫的形态，加深学生对课堂讲解知识的印象，使学 生对常见食源性寄生虫有一个真实而直观的认识。 二、设备及仪器 常见食源性寄生虫玻片（虫卵、成虫）、常见食源性寄生虫成虫（成虫感染人体组织、 器官）的浸制标本、普通光学显微镜。 三、实验主要内容 （1） 观察几种肉眼可见食源性寄生虫浸制标本； （2） 显微镜下观察几种常见食源性寄生原虫切片标本； （3） 观察几种食源性寄生虫感染人组织（器官）的浸制标本； 四、观察内容 （一）玻片 （1）受精蛔虫卵； （2）未受精蛔虫卵； （3）布氏姜片吸虫虫卵； （4）华支睾吸虫虫卵； （5）卫氏并殖吸虫虫卵； （6）鞭虫虫卵； （7）弓形虫包囊； （8）华支睾吸虫囊蚴； （9）阿米巴原虫包囊； （10）猪带绦虫成节； （11）猪带绦虫孕节； （12）旋毛虫囊包； （13）隐孢子虫卵囊； （14）华支睾吸虫成虫。 （二）浸制标本

（1）华支睾吸虫生活史：（2）蛔虫成虫；（3）布氏姜片吸虫成虫：（4）鞭虫成虫；（5）华支睾吸虫成虫；（6）卫氏并殖吸虫成虫：（7）广州管圆线虫成虫；（8）华支睾吸虫寄生的肝脏；（9）猪囊尾蝴；（10）旋毛虫成虫；（11）卫氏并殖吸虫寄生于肺脏。五、预期目标（1）了解常见食源性寄生虫的种类及形态特征：（2）熟悉几种重要寄生虫的形态，内部结构，寄生位置及感染后对宿主产生的病理变化：（3）掌握显微镜的规范使用和操作方法。六、思考题（1）除了上课及实验讲授的食源性寄生虫外，你还知道哪些，其食源性感染途径是什么？（2）学习寄生虫生活史的重要意义有哪些？七、实验报告非共性部分要求依据个人兴趣及熟悉程度绘制两种实验中看到的寄生虫形态、标出你认为重要的结构并附其生活史及食源性感染途径。2

2 （1）华支睾吸虫生活史； （2）蛔虫成虫； （3）布氏姜片吸虫成虫； （4）鞭虫成虫； （5）华支睾吸虫成虫； （6）卫氏并殖吸虫成虫； （7）广州管圆线虫成虫； （8）华支睾吸虫寄生的肝脏； （9）猪囊尾蚴； （10）旋毛虫成虫； （11）卫氏并殖吸虫寄生于肺脏。 五、预期目标 （1）了解常见食源性寄生虫的种类及形态特征； （2）熟悉几种重要寄生虫的形态，内部结构，寄生位置及感染后对宿主产生的病理变化； （3）掌握显微镜的规范使用和操作方法。 六、思考题 （1）除了上课及实验讲授的食源性寄生虫外，你还知道哪些，其食源性感染途径是什么？ （2）学习寄生虫生活史的重要意义有哪些？ 七、实验报告非共性部分要求 依据个人兴趣及熟悉程度绘制两种实验中看到的寄生虫形态、标出你认为重要的结构并 附其生活史及食源性感染途径

实验二、寄生虫虫卵的检查一、实验目的在食品中是否被某些寄生虫污染的检测及人和动物寄生虫感染诊断过程中虫卵的检测是最简单、最直接且最为经济经方法。对虫卵的检查是样品是否有寄生虫污染或感染的初步判断和定性检查。掌握漂浮法和沉淀法两种常规方法在今后食品安全检测中的应用尤为重要。二、设备及仪器饱和食盐水、200目筛子、200mL烧杯、胶头滴管、普通光学显微镜、50mL离心管、载玻片、盖玻片三、实验内容（1）漂浮法检测样品中是否含有寄生虫虫卵；（2）沉淀法检测样品中是否含有寄生虫虫卵；四、实验步骤（一）漂浮集卵法（1）称取由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫，为避免人畜共患风险，选择一种非人畜共患的寄生虫虫卵代替）的土壤样品5g：（2）将称取后的样品置于200mL烧杯中，先加入少量饱和食盐水（1L水中加食盐400g，搅拌混合后再加入约20倍的饱和食盐水）；（3）用200目筛子滤去较大的杂质，滤液静置30—60min；（4）用胶头滴管吸取表面液膜；（5）将液体滴至载玻片上，显微镜下观察；（二）沉淀集卵法（1）称取由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫，为避免人畜共患风险，选择一种非人畜共患的寄生虫虫卵代替）的土壤样品5g；（2）将称取后的样品置于200mL烧杯中，先加入约20倍体积的自来水混合成悬液；（3）用200目筛子滤去较大的杂质，；（4）静置15min后倾倒上清液，如此反复操作，直至上层液体透明为止，最后弃去上层液3

3 实验二、寄生虫虫卵的检查 一、实验目的 在食品中是否被某些寄生虫污染的检测及人和动物寄生虫感染诊断过程中虫卵的检测 是最简单、最直接且最为经济经方法。对虫卵的检查是样品是否有寄生虫污染或感染的初步 判断和定性检查。掌握漂浮法和沉淀法两种常规方法在今后食品安全检测中的应用尤为重 要。 二、设备及仪器 饱和食盐水、200 目筛子、200 mL 烧杯、胶头滴管、普通光学显微镜、50 mL 离心管、 载玻片、盖玻片 三、实验内容 （1） 漂浮法检测样品中是否含有寄生虫虫卵； （2） 沉淀法检测样品中是否含有寄生虫虫卵； 四、实验步骤 （一）漂浮集卵法 （1） 称取由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫，为 避免人畜共患风险，选择一种非人畜共患的寄生虫虫卵代替）的土壤样品 5g； （2）将称取后的样品置于 200 mL 烧杯中，先加入少量饱和食盐水（1L 水中加食盐 400g， 搅拌混合后再加入约 20 倍的饱和食盐水）； （3）用 200 目筛子滤去较大的杂质，滤液静置 30—60 min； （4）用胶头滴管吸取表面液膜； （5）将液体滴至载玻片上，显微镜下观察； （二）沉淀集卵法 （1）称取由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫，为 避免人畜共患风险，选择一种非人畜共患的寄生虫虫卵代替）的土壤样品 5g； （2）将称取后的样品置于 200 mL 烧杯中，先加入约 20 倍体积的自来水混合成悬液； （3）用 200 目筛子滤去较大的杂质，； （4）静置 15 min 后倾倒上清液，如此反复操作，直至上层液体透明为止，最后弃去上层液

体，将沉淀物少许置于载玻片上，显微镜下观察。附：在有低速水平离心机的情况下还可采用离心沉淀：取1-2g待检样品置于50mL离心管中，加20倍以上的水制成悬液，经200目筛子过滤到另一个离心管中，以800rpm离心10min，弃去上清，取沉淀少许置于载玻片上观察。五、预期目的(1)掌握漂浮法检测样品中寄生虫虫卵的方法：（2）掌握沉淀法检测样品中寄生虫虫卵的方法。六、思考题（1）与直接涂片法相比，通过上述两种方法富集虫卵后再行观察的优点是什么？（2）如何在实际操作中选择漂浮法和沉淀法，其各自的优缺点有哪些？七、实验报告非共性部分要求画出在显微镜下观察到的寄生虫虫卵的形态，4

4 体，将沉淀物少许置于载玻片上，显微镜下观察。 附：在有低速水平离心机的情况下还可采用离心沉淀： 取 1-2 g 待检样品置于 50 mL 离心管中，加 20 倍以上的水制成悬液，经 200 目筛子过 滤到另一个离心管中，以 800 rpm 离心 10 min，弃去上清，取沉淀少许置于载玻片上观察。 五、预期目的 （1） 掌握漂浮法检测样品中寄生虫虫卵的方法； （2） 掌握沉淀法检测样品中寄生虫虫卵的方法。 六、思考题 （1）与直接涂片法相比，通过上述两种方法富集虫卵后再行观察的优点是什么？ （2）如何在实际操作中选择漂浮法和沉淀法，其各自的优缺点有哪些？ 七、实验报告非共性部分要求 画出在显微镜下观察到的寄生虫虫卵的形态

实验三、寄生虫虫卵的收集与计数一、实验目的在食品中是否被某些寄生虫污染的检测及人和动物寄生虫感染诊断过程中虫卵的检测是最简单、最直接且最为经济经方法。收集虫卵后对其可以对寄生虫污染（感染）程度进行定量判断。因此掌握寄生虫虫卵的富集和计数方法在今后食品安全检测中的应用尤为重要。二、设备及仪器低速台式水平转子离心机、饱和食盐水、80目/200目筛子、塑料盆、200mL烧杯、胶头滴管、普通光学显微镜、改良麦克马斯特计数板、载玻片、盖玻片三、实验内容（1）从土壤样品（为保证实验区域卫生，利用土壤模拟粪便样品）中利用饱和食盐水（法检测（定性）/富集人畜共患寄生虫虫卵（为保证实验人员人身安全，用形态相似的非人畜共患寄生虫虫卵代替）：（2）利用改良马克马斯特计数板对样品中的虫卵数量进行计数，从而计算样品中虫卵总量：四、实验步骤（1）将由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫）的土壤样品加入少量自来水充分混匀，称重；（2）向粪便中加入至少3倍体积的自来水，充分混匀，然后用80目筛子进行过滤，分别收集滤液及滤渣；（3）将滤渣再用至少3倍体积的自来水混匀后用80目筛子过滤一遍，弃去滤渣：（4）将两次滤液混合，用200目筛子过滤一次：（5）滤液静置2h以上，而后快速弃去上清；（6）将混悬液3600rpm离心5min，收集所有沉淀（7）沉淀加入3倍以上体积饱和食盐水充分搅拌均匀，3600rpm离心5min漂浮卵囊：（8）用吸管吸取上层含有卵囊的液体，加入一个大烧杯中：（9）重复（8）、（9）两步至少3次；（10）收集所有的上清液，加入至少5倍体积的自来水，3600rpm离心5min沉淀卵囊；（11）沉淀用自来水悬起，转移至合适容积的离心管或烧杯中；（12）利用改良麦克马斯特计数板计算富集后的卵囊总数。5

5 实验三、寄生虫虫卵的收集与计数 一、实验目的 在食品中是否被某些寄生虫污染的检测及人和动物寄生虫感染诊断过程中虫卵的检测 是最简单、最直接且最为经济经方法。收集虫卵后对其可以对寄生虫污染（感染）程度进行 定量判断。因此掌握寄生虫虫卵的富集和计数方法在今后食品安全检测中的应用尤为重要。 二、设备及仪器 低速台式水平转子离心机、饱和食盐水、80 目/200 目筛子、塑料盆、200 mL 烧杯、胶 头滴管、普通光学显微镜、改良麦克马斯特计数板、载玻片、盖玻片 三、实验内容 （1）从土壤样品（为保证实验区域卫生，利用土壤模拟粪便样品）中利用饱和食盐水（ 法检测（定性）/富集人畜共患寄生虫虫卵（为保证实验人员人身安全，用形态相似的 非人畜共患寄生虫虫卵代替）； （2）利用改良马克马斯特计数板对样品中的虫卵数量进行计数，从而计算样品中虫卵总量； 四、实验步骤 （1）将由教师事先准备好的混合柔嫩艾美耳球虫卵囊（特异性感染鸡的一种寄生虫） 的土壤样品加入少量自来水充分混匀，称重； （2）向粪便中加入至少 3 倍体积的自来水，充分混匀，然后用 80 目筛子进行过滤，分 别收集滤液及滤渣； （3）将滤渣再用至少 3 倍体积的自来水混匀后用 80 目筛子过滤一遍，弃去滤渣； （4）将两次滤液混合，用 200 目筛子过滤一次； （5）滤液静置 2 h 以上，而后快速弃去上清； （6）将混悬液 3600 rpm 离心 5 min，收集所有沉淀； （7）沉淀加入 3 倍以上体积饱和食盐水充分搅拌均匀，3600 rpm 离心 5 min 漂浮卵囊； （8）用吸管吸取上层含有卵囊的液体，加入一个大烧杯中； （9）重复（8）、（9）两步至少 3 次； （10）收集所有的上清液，加入至少 5 倍体积的自来水，3600 rpm 离心 5 min 沉淀卵囊； （11）沉淀用自来水悬起，转移至合适容积的离心管或烧杯中； （12）利用改良麦克马斯特计数板计算富集后的卵囊总数

附：麦克马斯特计数板的原理及使用方法：（1）原理：麦克马斯特计数法的原理是用饱和食盐水作为悬浮溶液，把卵囊卵囊与比重较大的杂质分开，使卵囊漂浮至计数室表层，与计数室上层刻度刻度部分处在同一层面上：计数板上每个计数室容积为1×1×0.15-=0.15mL，镜见计数0.15mL计数室内的卵囊数量，最后根据溶液体积和悬液稀释倍数计算单位体积内卵囊的浓度。（2）使用方法：每毫升卵囊悬液中卵囊总数：按照卵囊悬液：饱和食盐水=1：9的比例混合均匀，迅速从上缘注入计数室内，在显微镜载物台上静置3-5min，待卵囊漂浮到上层后在10×物镜下观察并计数，每个计数室内有100个方格，其体积为0.15mL，分别查完2个计数室100个方格内的卵囊数量N1，N2，然后计算每毫升卵囊悬液中卵囊总数量M，计算公式如下：[(N1+N2)/(2×0.15)]X10其中(N1+N2)/2为平均每个计数室内卵囊数，0.15为每个计数室有效体积0.15mL，10为原卵囊悬液稀释倍数。五、预期目的（1）掌握样品（粪便/土壤）中虫卵的检查和收集方法（饱和食盐水漂浮法）：（2）掌握改良麦克马斯特计数板的使用方法。六、思考题（1）哪些寄生虫以虫卵的方式通过食源性途径感染人：（2）除了饱和食盐水，还有哪些溶液可以用于虫卵的检测和富集，其应用范围及优缺点是什么？七、实验报告非共性部分要求每组计算出所收集到的虫卵总数，并写出详细计算步骤。6

6 附：麦克马斯特计数板的原理及使用方法： （1）原理：麦克马斯特计数法的原理是用饱和食盐水作为悬浮溶液，把卵囊卵囊与 比重较大的杂质分开，使卵囊漂浮至计数室表层，与计数室上层刻度刻度部分 处在同一层面上；计数板上每个计数室容积为 1×1×0.15-=0.15mL，镜见计数 0.15mL 计数室内的卵囊数量，最后根据溶液体积和悬液稀释倍数计算单位体积 内卵囊的浓度。 （2）使用方法：每毫升卵囊悬液中卵囊总数：按照卵囊悬液：饱和食盐水=1：9 的比 例混合均匀，迅速从上缘注入计数室内，在显微镜载物台上静置 3-5 min，待卵囊漂浮 到上层后在 10×物镜下观察并计数，每个计数室内有 100 个方格，其体积为 0.15 mL， 分别查完 2 个计数室 100 个方格内的卵囊数量 N1，N2，然后计算每毫升卵囊悬液中卵 囊总数量 M，计算公式如下： [(N1+N2)/(2×0.15)]×10 其中(N1+N2)/2 为平均每个计数室内卵囊数，0.15 为每个计数室有效体积 0.15 mL， 10 为原卵囊悬液稀释倍数。 五、预期目的 （1）掌握样品（粪便/土壤）中虫卵的检查和收集方法（饱和食盐水漂浮法）； （2）掌握改良麦克马斯特计数板的使用方法。 六、思考题 （1）哪些寄生虫以虫卵的方式通过食源性途径感染人； （2）除了饱和食盐水，还有哪些溶液可以用于虫卵的检测和富集，其应用范围及优缺 点是什么？ 七、实验报告非共性部分要求 每组计算出所收集到的虫卵总数，并写出详细计算步骤

L1合内素古农业大学ELfLAGRICTURA食源性人畜共患病实验报告实验名称：学院：食品科学与工程专业：食品质量与安全小组:姓名：学号：任课教师：年月日实验日期：

7 食源性人畜共患病实验报告 实验名称： 学 院：食品科学与工程 专 业：食品质量与安全 小 组： 姓 名： 学 号： 任课教师： 实验日期： 年 月 日

一、实验项目实验题目：小组合作：是否小组成员：实验目的：实验设备、仪器及材料8

8 一、实验项目 实验题目： 小组合作：是 √ 否 小组成员： 实验目的： 实验设备、仪器及材料

实验步骤：二、实验结果与讨论9

9 实验步骤： 二、实验结果与讨论