延安大学：《组织学与胚胎学 Histology and embryology》课程教学资源（参考文献）显微技术功夫茶2 聚光器的设置和调节

显微技术功夫茶2:聚光器的设置和调节 作者 在物镜和目镜正常的前提下,显微镜之聚光器是否正确设置,将决定显 微图像能否达到应有的分辨率和清晰度。因此,学会调节聚光器是掌握显微 技术最重要的基本功。在实践中,一台安装好的显微镜,需要使用者经常去 调节的,往往也只有聚光器 聚光器的调节方法可概括为“三对”对焦对中对光圈 对焦”是为了齐焦,即通过升降调节,使聚光器的照明焦点与物镜的成 像焦点互相平齐(平面重叠),从而提髙图像的清晰度;“对中”是为了合 轴,即将聚光器在ⅹ/Y方向平面位移,使其照明光轴与物镜成像光轴合二为 ,实现视野亮度均匀:“对光圈”是针对所用物镜的数值孔径来调定聚光器 的孔径光圈(也叫虹彩光圈 iris diaphragm),使两个孔径相同,实现图像最 佳分辨率。值得注意的是,不同放大倍率(甚至相同倍率但不同厂家不同规 格)的物镜有不同的数值孔径,都标示在物镜镜头的外壳侧面上(图3)。 聚光器调节(三对)的具体操作步骤如下:(相关调节钮参见图4:调节 效应参见图5) 1.将标本安置载物台上并通过目镜观察,同时旋转粗细调焦螺旋,使 显微镜焦距达到相对清晰 2旋转视场光圈钮,使光圈缩小至只见一小多边形光孔(图5-A); 3.旋转聚光器升降钮,使光孔边缘达到相对清晰(即齐焦,图5 D) 4.用左右手同时旋转调节聚光器的左右光轴调节钮,使光孔作X/Y方 向平移至居中(即合轴,图5-B) 5.旋转视场光圈钮,使视场光圈扩大至恰好充满目镜视野(图5 6.根据所用物镜的孔径数值,旋转聚光器孔径光圈钮至相同刻度(对 光圈,如40×物镜的孔径值为0.65,则把聚光器孔径光圈调定在 0.65)

显微技术功夫茶 2: 聚光器的设置和调节 作者：江一平 在物镜和目镜正常的前提下，显微镜之聚光器是否正确设置，将决定显 微图像能否达到应有的分辨率和清晰度。因此，学会调节聚光器是掌握显微 技术最重要的基本功。在实践中，一台安装好的显微镜，需要使用者经常去 调节的，往往也只有聚光器。 聚光器的调节方法可概括为“三对”——对焦对中对光圈。 “对焦”是为了齐焦，即通过升降调节，使聚光器的照明焦点与物镜的成 像焦点互相平齐（平面重叠），从而提高图像的清晰度；“对中”是为了合 轴，即将聚光器在 X/Y 方向平面位移，使其照明光轴与物镜成像光轴合二为 一，实现视野亮度均匀；“对光圈”是针对所用物镜的数值孔径来调定聚光器 的孔径光圈（也叫虹彩光圈 iris diaphragm），使两个孔径相同，实现图像最 佳分辨率。值得注意的是，不同放大倍率（甚至相同倍率但不同厂家不同规 格）的物镜有不同的数值孔径，都标示在物镜镜头的外壳侧面上（图 3）。 聚光器调节（三对）的具体操作步骤如下：（相关调节钮参见图 4；调节 效应参见图 5） 1.将标本安置载物台上并通过目镜观察，同时旋转粗细调焦螺旋，使 显微镜焦距达到相对清晰； 2.旋转视场光圈钮，使光圈缩小至只见一小多边形光孔（图 5-A）； 3.旋转聚光器升降钮，使光孔边缘达到相对清晰（即齐焦，图 5- D）； 4.用左右手同时旋转调节聚光器的左右光轴调节钮，使光孔作 X/Y 方 向平移至居中（即合轴，图 5-B）； 5.旋转视场光圈钮，使视场光圈扩大至恰好充满目镜视野（图 5- C）； 6.根据所用物镜的孔径数值，旋转聚光器孔径光圈钮至相同刻度（对 光圈，如 40×物镜的孔径值为 0.65，则把聚光器孔径光圈调定在 0.65）

聚光器如此“三对”后,即可获得分辨率和清晰度俱佳(清晰而锐利)的 图像(图5-E) 附注:上述过程还可在网络上作计算机模拟练习,网址: https://www.microscopyu.com/tutorials/kohler 附图: 数值孔径值 司 数值孔径值 10/0.2520/0.40 40 160/0.17 1600600/1.250 160/0.17 图3.物镜参数标识 (上排数据的分母为数值孔径值)

聚光器如此“三对”后，即可获得分辨率和清晰度俱佳（清晰而锐利）的 图像（图 5-E）。 附 注 ： 上 述 过 程 还 可 在 网 络 上 作 计 算 机 模 拟 练 习 ， 网 址 ： https://www.microscopyu.com/tutorials/kohler 附图：

聚光器升降钮 聚光器托径光圈 调焦螺 息.光轴调节钮家 视场光图钮 A.显微镜左侧面观 B.显微镜右侧面观 图4显微镜聚光器相关调节钮示意 组胚小天地 图5.明场显微镜聚光器的调节效应(40×物镜摄影) 文章作者:江一平,教授,福建医科大学、厦门大学医学院生殖调控与生殖健康福建省 高校重点实验室

文章作者：江一平，教授，福建医科大学、厦门大学医学院生殖调控与生殖健康福建省 高校重点实验室