《生物化学实验》课程学习讲义（考研资料）目录

目录 〔1〕理论部分 1.绪论 1.1生物化学实验技术发展简史 1.2实验室规则 1.3实验室安全及防护知识 1569 1.4实验记录与实验报告 1.5实验室基本操作 1.6缓冲溶液与pH测定 1.7生化实验室的基本设施与装备 2.生物大分子的制备 2.1概述 2.2生物大分子制备的前处理 2.2.1生物材料的选择 2.2.2细胞的破碎 2.2.3生物大分子的提取 2.3生物大分子的分离纯化 2.3.1沉淀法 2.3.2透析 2.3.3超滤 2.3.4冰冻干燥 2.3.5样品的保存 2.3.6分离纯化方法的选择 3层析技术 3.1层析技术概述 3.1.1引言 53 3.1.2层析的基本理论 3.1.3层析的基本概念 3.1.4层析法的分类 3.1.5柱层析的基本装置及基本操作 3.2凝胶层析 3.2.1简介 3.2.2凝胶层析的基本原理 凝胶层析的基本概念 64 3.2.4凝胶的种类和性质 3.2.5凝胶的选择、处理和保存 3.2.6凝胶层析的基本操作

I 目 录 〔Ⅰ〕 理论部分 1.绪论 1 1.1 生物化学实验技术发展简史 1 1.2 实验室规则 5 1.3 实验室安全及防护知识 6 1.4 实验记录与实验报告 9 1.5 实验室基本操作 11 1.6 缓冲溶液与 pH 测定 16 1.7 生化实验室的基本设施与装备 25 2.生物大分子的制备 30 2.1 概述 30 2.2 生物大分子制备的前处理 32 2.2.1 生物材料的选择 32 2.2.2 细胞的破碎 32 2.2.3 生物大分子的提取 34 2.3 生物大分子的分离纯化 36 2.3.1 沉淀法 36 2.3.2 透析 43 2.3.3 超滤 44 2.3.4 冰冻干燥 46 2.3.5 样品的保存 49 2.3.6 分离纯化方法的选择 50 3 层析技术 53 3.1 层析技术概述 53 3.1.1 引言 53 3.1.2 层析的基本理论 54 3.1.3 层析的基本概念 55 3.1.4 层析法的分类 58 3.1.5 柱层析的基本装置及基本操作 59 3.2 凝胶层析 63 3.2.1 简介 63 3.2.2 凝胶层析的基本原理 63 3.2.3 凝胶层析的基本概念 64 3.2.4 凝胶的种类和性质 67 3.2.5 凝胶的选择、处理和保存 70 3.2.6 凝胶层析的基本操作 71

3.2.7凝胶层析的应用 3.3离子交换层析 75 3.3.1简介 3.3.2基本原理… 3.3.3离子交换剂的种类和性质 3.3.4离子交换剂的选择、处理和保存 3.3.5离子交换层析的基本操作 3.3.6离子交换层析的应用 3.4亲和层析 3.4.1简介 3.4.2亲和层析的基本原理 83 3.4.3亲和吸附剂 3.4.4亲和层析的基本操作 3.4.5亲和层析的应用 4电泳技术 4.1电泳技术发展简史 4.2电泳的基本原理 4.3影响电泳分离的主要因素 4.4电泳的分类 4.5纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳 101 4.6琼脂糖凝胶电泳 4.7聚丙烯酰胺凝胶电泳 4.8SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS一PAGE) 4.9梯度凝胶电泳 4.10等电聚焦 110 4.11二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE) 4.12蛋白质的检测、鉴定及回收 112 4.13蛋白质印迹( Western blotting) 4.14毛细管电泳 115 5离心技术 5.1基本原理 120 5.2离心机的主要构造和类型 121 5.3制备性超速离心的分离方法 124 5.4离心操作的注意事项 6分光光度技术 6.1基本原理 6.2分光光度计的组成和构造 13 6.3分光光度法在生化实验技术中的应用 7高效液相色谱技术(HPL0) 7.1基本原理 140

II 3.2.7 凝胶层析的应用 73 3.3 离子交换层析 75 3.3.1 简介 75 3.3.2 基本原理 75 3.3.3 离子交换剂的种类和性质 76 3.3.4 离子交换剂的选择、处理和保存 78 3.3.5 离子交换层析的基本操作 80 3.3.6 离子交换层析的应用 82 3.4 亲和层析 84 3.4.1 简介 84 3.4.2 亲和层析的基本原理 83 3.4.3 亲和吸附剂 84 3.4.4 亲和层析的基本操作 90 3.4.5 亲和层析的应用 92 4 电泳技术 96 4.1 电泳技术发展简史 96 4.2 电泳的基本原理 96 4.3 影响电泳分离的主要因素 99 4.4 电泳的分类 100 4.5 纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳 101 4.6 琼脂糖凝胶电泳 103 4.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 103 4.8 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE） 106 4.9 梯度凝胶电泳 119 4.10 等电聚焦 110 4.11 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE） 111 4.12 蛋白质的检测、鉴定及回收 112 4.13 蛋白质印迹（Western blotting） 113 4.14 毛细管电泳 115 5 离心技术 120 5.1 基本原理 120 5.2 离心机的主要构造和类型 121 5.3 制备性超速离心的分离方法 124 5.4 离心操作的注意事项 126 6 分光光度技术 128 6.1 基本原理 128 6.2 分光光度计的组成和构造 134 6.3 分光光度法在生化实验技术中的应用 139 7 高效液相色谱技术（HPLC） 140 7.1 基本原理 140

7.2基本参数 7.3HPLC系统构成 149 8免疫化学技术 1免疫化学技术简介-15 8.2抗原的免疫原性和专一性 8.3抗体的结构和功能 155 8.4抗原抗体的结合“ 8.5动物的常规免疫 8.6双向免疫扩散及免疫电泳 8.7酶联免疫吸附法 165 〔)实验部分 实验一蛋白质含量的测定法 170 实验二凝胶层析法测定蛋白质分子量 181 实验三等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点184 实验四蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验五小牛胸腺DNA的制备 实验六小牛胸腺DNA熔解温度的测量 实验七脱辅基血红蛋白的制备和重组 实验八离子交换柱层析分离核苷酸 实验九酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究灬 实验十猪胰蛋白酶的纯化及其活力测定 244 实验十一亲和层析纯化胰蛋白酶 247 实验十二兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质的测定 257 实验十三兔疫化学实验 264 实验十四“干实验”:微机模拟蛋白质纯化实验一 实验十五 Using the computer in biochemical research 附录 722分光光度计操作规程 312 二、753型(53W)紫外何可见分光光度计操作规程 2 三、 SPEKOL-100使用说明 四、恒流泵操作规程 五、自动部分收集器操作规程

III 7.2 基本参数 143 7.3 HPLC 系统构成 149 8 免疫化学技术 153 8.1 免疫化学技术简介 153 8.2 抗原的免疫原性和专一性 153 8.3 抗体的结构和功能 155 8.4 抗原抗体的结合 157 8.5 动物的常规免疫 160 8.6 双向免疫扩散及免疫电泳 161 8.7 酶联免疫吸附法 165 〔Ⅱ〕 实验部分 实验一 蛋白质含量的测定法 170 实验二 凝胶层析法测定蛋白质分子量 181 实验三 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 184 实验四 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 188 实验五 小牛胸腺 DNA 的制备 203 实验六 小牛胸腺 DNA 熔解温度的测量 206 实验七 脱辅基血红蛋白的制备和重组 209 实验八 离子交换柱层析分离核苷酸 212 实验九 酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究 222 实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活力测定 244 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶 247 实验十二 兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质的测定 257 实验十三 免疫化学实验 264 实验十四 “干实验”：微机模拟蛋白质纯化实验 292 实验十五 Using the computer in biochemical research 294 附 录 一、 722 分光光度计操作规程 312 二、 753 型(53W)紫外/可见分光光度计操作规程 312 三、 SPEKOL-1100 使用说明 312 四、 恒流泵操作规程 313 五、 自动部分收集器操作规程 314

六、电导率仪使用说明 314 七、日立高速冷冻离心机操作程序 31 八、各种仪器的使用注意事项 九、标准缓冲液pH值与温度对照表 十、常用蛋白质分子量标准参照物 十、层析法常用数据表及性质 319 十二、常用缓冲液的配制方法 十三、实验室中常用酸碱的比重和浓度 十四、硫酸铵饱和度的常用表 十五、常见蛋白质分子量参考值 十六、常见蛋白质等电点参考值 十七、元素的原子量表 十八、高心机转数(rpm)与相对离心力(RC)的换算 340 十九、 SPECORD200使用说明 参考文献一 350

IV 六、 电导率仪使用说明 314 七、 日立高速冷冻离心机操作程序 314 八、 各种仪器的使用注意事项 316 九、 标准缓冲液 pH 值与温度对照表 318 十、 常用蛋白质分子量标准参照物 319 十一、 层析法常用数据表及性质 319 十二、 常用缓冲液的配制方法 326 十三、 实验室中常用酸碱的比重和浓度 331 十四、 硫酸铵饱和度的常用表 332 十五、 常见蛋白质分子量参考值 333 十六、 常见蛋白质等电点参考值 334 十七、 元素的原子量表 337 十八、 离心机转数(rpm)与相对离心力(RCF)的换算 340 十九、 SPECORD 200 使用说明 341 参考文献 350