华南农业大学：《昆虫毒理学》课程电子教案（PPT教学课件）第九章 昆虫毒理学研究方法新进展

第九章杀虫剂毒理学研究新方法

I.高通量离体活性测定方法在杀虫活性研究方面的应用II.细胞毒理学在杀虫剂作用机理方面的应用III.电生理测定方法在杀虫剂作用机理方面的应用IV.QSAR分析方法V.分子生物学研究方法在杀虫剂作用机理方面的应用

I. 高通量离体活性测定方法在杀虫活性研究方面的应用 II. 细胞毒理学在杀虫剂作用机理方面的应用 III. 电生理测定方法在杀虫剂作用机理方面的应用 IV. QSAR分析方法 V. 分子生物学研究方法在杀虫剂作用机理方面的应用

I.高通量离体活性测定方法高通量筛选（highthroughputscreening，HTS）就是以玻璃片、膜片或培养板为载体，用高密度、微量自动化加样的方法，实现短时间内分析大量样本的筛选方法。采用传统方法，一年内仅能筛选75000个样品采用高通量筛选，每天的筛选量可高达100000种化合物

高通量筛选（high throughput screening，HTS ） 就是以玻璃片、膜片或培养板为载体，用高密 度、微量自动化加样的方法，实现短时间内分 析大量样本的筛选方法。 采用传统方法，一年内仅能筛选75000个样品。 采用高通量筛选，每天的筛选量可高达100 000 种化合物

高通量筛选的组成1.自动化操作系统2.高灵敏度的检测系统3.分子、细胞水平的高特异性体外筛选模型4.被筛样品管理库5.数据采集传输处理系统

1. 自动化操作系统 2. 高灵敏度的检测系统 3. 分子、细胞水平的高特异性体外筛选模型 4. 被筛样品管理库 5. 数据采集传输处理系统

高通量筛选的应用院Raman/R自编码激球表微球固定Ranan/IR CharactenizeImmobilize beadsbar-oodedbead0微球表面相互作用结论微球上的对比Inieract mbead suface1化合物为Compare Concude具有相互作用Compatndalbeadis hunt荧光谱相互作用分析Fiuorescemcoamalyzeinteractiom修R靶点参自编码光谐识别微球最承表面合成的候选化合物TargetOptical-coded boad?Canmpoudsatbcadsrfuces园高通量筛选流程图赵元弟，杜磊，陈同生，曾绍群，骆清铭.高通量药物筛选技术的研究现状及光编码技术在其中的应用激光生物学报，2003（03）

1. 对样品成分进行大规模的生物活性筛选， 是高通量筛选的最主要的应用。 高通量筛选流程图 赵元弟，杜磊，陈同生，曾绍群，骆清铭.高通量药物筛选技术的研究现状及光编码技术在其中的应用.激光生物学报，2003（03）

高通量筛选的应用2.从分子水平、细胞水平认识药物的作用和作用机理。000中心物心用性对照标准品.50000000006002.0%0000000000005.090096000000阴性对照9998900000格材

2. 从分子水平、细胞水平认识药物的作用和 作用机理

II.细胞毒理学方法1.MTT法与细胞毒性2．流式细胞术

1. MTT法与细胞毒性 2. 流式细胞术

MTT法原理MTT法（MTT比色法），是一种检测细胞存活和生长的方法。其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚矾（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比

MTT法（MTT比色法），是一种检测细胞存活和生长的 方法。 其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并 沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO） 能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处 测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数 范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比

MTT法操作流程实例空腹静脉血1~2ml肝素抗凝，离心曲外水装密吉

流式细胞术流式细胞术（FlowCytometry,FCM）是一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术

流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种在 液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生 物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中 加以分类收集的技术