华中农业大学：《农药分析》课程教学资源（PPT课件讲稿）第六章 免疫学检测方法

免疫学检测方法 ■免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附 检测和放射免疫技术,该方面的研究取得 了长足的发展。由于该方法操作简单, 前处理简化,检测快速、准确、敏感, 检验成本低,检测容量大,可同时进行 大批量样品检测。因此.具有潜在的广 泛应用价值

免疫学检测方法 ◼ 免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附 检测和放射免疫技术,该方面的研究取得 了长足的发展。由于该方法操作简单， 前处理简化，检测快速、准确、敏感， 检验成本低，检测容量大，可同时进行 大批量样品检测。因此．具有潜在的广 泛应用价值

■免疫学检测技术是近几年发展起来的新 技术,主要包括放射免疫技术、免疫酶 技术、免疫荧光技术和免疫电镜技术等, 现已广泛地应用于各个领域中 10多年前,一些研究者开始尝试把放射 免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检 测,并取得极大成功

◼ 免疫学检测技术是近几年发展起来的新 技术，主要包括放射免疫技术、免疫酶 技术、免疫荧光技术和免疫电镜技术等， 现已广泛地应用于各个领域中。 ◼ 10多年前，一些研究者开始尝试把放射 免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检 测，并取得极大成功

其中应用最多的是固相放射免疫饱和分 析技术和酶联免疫吸附检测技术 ■在这些检测技术中其核心反应都是抗原 抗体反应。所谓抗原是指一切具有抗原 性的物质: 抗体(又称免疫球蛋白),是由抗原刺激机 体而产生的特异性球蛋白

◼ 其中应用最多的是固相放射免疫饱和分 析技术和酶联免疫吸附检测技术。 ◼ 在这些检测技术中其核心反应都是抗原 抗体反应。所谓抗原是指一切具有抗原 性的物质： ◼ 抗体(又称免疫球蛋白)，是由抗原刺激机 体而产生的特异性球蛋白

■作为抗原(完全抗原)需要包括两个方面的 特性:免疫原性和反应原性 ■免疫原性是指能够刺激机体产生抗体或 诱导机体形成免疫回答反应的特性。 反应原性是指能够与其诱导产生的抗体 或致敏淋巴细胞发生反应的特性。完全 抗原是一些大分子物质(分子量大于万), 如蛋白质等

◼ 作为抗原(完全抗原)需要包括两个方面的 特性：免疫原性和反应原性。 ◼ 免疫原性是指能够刺激机体产生抗体或 诱导机体形成免疫回答反应的特性。 ◼ 反应原性是指能够与其诱导产生的抗体 或致敏淋巴细胞发生反应的特性。完全 抗原是一些大分子物质(分子量大于l万)， 如蛋白质等

■如果一种抗原只有反应原性而没有免疫 原性则称为不完全抗原(半抗原),它通常 是一些小分子物质(分子量小于1000), 必须与其它大分子物质结合后才具有免 疫原性。各种农药属于这类物质,不具 有免疫原性.因此农药残留的免疫学方 法检测要较医学等领域中致病微生物等 完全抗原的免疫学方法检测复杂得多

◼ 如果一种抗原只有反应原性而没有免疫 原性则称为不完全抗原(半抗原)，它通常 是一些小分子物质(分子量小于1000)， 必须与其它大分子物质结合后才具有免 疫原性。各种农药属于这类物质，不具 有免疫原性．因此农药残留的免疫学方 法检测要较医学等领域中致病微生物等 完全抗原的免疫学方法检测复杂得多

■农药残留酶联免疫,首先要把农药与载 体蛋白连接起来,形成农药一载体蛋白 结合物免疫原,才可用来免疫动物制备 抗体。因此能否合成稳定、具有良好免 疫原性的农药一载体蛋白结合物是整个 农药残留免疫学检测技术研究的关键

◼ 农药残留酶联免疫，首先要把农药与载 体蛋白连接起来，形成农药一载体蛋白 结合物免疫原，才可用来免疫动物制备 抗体。因此能否合成稳定、具有良好免 疫原性的农药一载体蛋白结合物是整个 农药残留免疫学检测技术研究的关键

农药免疫学检测技术的原理 农药免疫学检测应用最多的两种固相免疫技术 是固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术 ■固相放射免疫技术是采用标记抗原与未知抗原 竞争限定量的固相抗体结合位点,然后通过测 定抗原一抗体结合物中放射性强度的改变,确 定未知抗原的存在及含量

农药免疫学检测技术的原理 ◼ 农药免疫学检测应用最多的两种固相免疫技术 是固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术。 ◼ 固相放射免疫技术是采用标记抗原与未知抗原 竞争限定量的固相抗体结合位点，然后通过测 定抗原一抗体结合物中放射性强度的改变，确 定未知抗原的存在及含量

酶联免疫( ELISA) ELISA是通过在合适的载体上,酶标限定 量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位 点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的 标记抗体结合位点,形成抗体复合物 在一定底物参与下,复合物上的酶催化 底物,使其水解、氧化或还原成另一种 带色物质。由于酶的降解底物与显色是 成正比的,通过眼观或分光光度计测定, 从而确定是否存在未知抗原或含量

酶联免疫（ ELISA） ◼ ELISA是通过在合适的载体上，酶标限定 量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位 点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的 标记抗体结合位点，形成抗体复合物。 在一定底物参与下，复合物上的酶催化 底物，使其水解、氧化或还原成另一种 带色物质。由于酶的降解底物与显色是 成正比的，通过眼观或分光光度计测定， 从而确定是否存在未知抗原或含量

但由于放射免疫技术涉及放射材料的使 用和经常制备放射标记物,检测设备也 比较昂贵,所以越来越多地被较为安全、 简便的 ELISA方法取代。 ■在利用免疫技术进行农药定量检测时, 需要制备标准曲线,之后根据制备好的 标准曲线即可对农药残留进行定量

◼ 但由于放射免疫技术涉及放射材料的使 用和经常制备放射标记物，检测设备也 比较昂贵，所以越来越多地被较为安全、 简便的ELISA方法取代。 ◼ 在利用免疫技术进行农药定量检测时， 需要制备标准曲线，之后根据制备好的 标准曲线即可对农药残留进行定量