华中农业大学：《农药分析》课程教学资源（PPT课件讲稿）第五章 薄层分析、酶抑制技术和荧光技术

薄层分析、酶抑制技术和荧光 技术 薄层分析、酶抑制技术和荧光技术都是 基于薄层展开后用不同的现色方法进行 显色分析的技术。其中薄层的制备、展 开和显色技术是该分析方法的基础

薄层分析、酶抑制技术和荧光 技术 v薄层分析、酶抑制技术和荧光技术都是 基于薄层展开后用不同的现色方法进行 显色分析的技术。其中薄层的制备、展 开和显色技术是该分析方法的基础

薄层技术 薄层色谱法是把固定相(活性吸附剂或键合 剂)均匀的铺在一块平整的板上,制成薄板 厚度约0.25mm。与纸上色谱法一样,点样经 展开剂展开。 令特点:操作简单、效果比纸上色谱法要好 显色后斑点集中并且可以定量分析(与薄层 扫描仪配套)。 令试样量少,几微克到几百微克 可以为高效液相色谱选择合适的固定相

薄层技术 v 薄层色谱法是把固定相（活性吸附剂或键合 剂）均匀的铺在一块平整的板上，制成薄板。 厚度约0.25mm。与纸上色谱法一样，点样经 展开剂展开。 v 特点：操作简单、效果比纸上色谱法要好。 v 显色后斑点集中并且可以定量分析（与薄层 扫描仪配套）。 v 试样量少，几微克到几百微克。 v 可以为高效液相色谱选择合适的固定相

近代薄层色谱发展的类别简介 令薄层板法(略) 令圆筒色谱(管状色谱)法将固定相涂渍在管 的外壁上,可以减少横向扩散,宜于制备色 谱用。 令如果为小孔径管就为色谱棒。 令锥形薄层色谱法将薄层板制作成 倒圆锥体。展开时可以使溶剂前沿 扩大,展开剂向前沿扩散时形成速度梯度,结 果抵消了谱带扩展,使试样再度浓缩

近代薄层色谱发展的类别简介 v 薄层板法（略） v 圆筒色谱（管状色谱）法 将固定相涂渍在管 的外壁上，可以减少横向扩散，宜于制备色 谱用。 v 如果为小孔径管就为色谱棒。 v 锥形薄层色谱法 将薄层板制作成 倒圆锥体。展开时可以使溶剂前沿 扩大，展开剂向前沿扩散时形成速度梯度，结 果抵消了谱带扩展，使试样再度浓缩

径向薄层色谱法 两种类型:一种与圆形纸上色谱方法相似,分离效 果可以提高1.5倍;另一种是将普通薄层板点样处固 定相刮去,使展开剂只能通过点样处狭窄部分向前 方弧形展开。 令连续展开法 令在密闭槽中进行上行展开, 展开剂移动一定距离后即终了 令顶板蒸发展开 令用盖带有槽孔的展开槽,使部分薄层板露出槽外 展开时,槽里的展开剂不能蒸发,当上升到槽外时 就蒸发。这种展开法能够缩短展开剂移动满的斑点 之间的距离,不能够提高分离效能

径向薄层色谱法 v 两种类型：一种与圆形纸上色谱方法相似，分离效 果可以提高1.5倍；另一种是将普通薄层板点样处固 定相刮去，使展开剂只能通过点样处狭窄部分向前 方弧形展开。 v 连续展开法 v 在密闭槽中进行上行展开， 展开剂移动一定距离后即终了。 v 顶板蒸发展开 v 用盖带有槽孔的展开槽，使部分薄层板露出槽外。 展开时，槽里的展开剂不能蒸发，当上升到槽外时 就蒸发。这种展开法能够缩短展开剂移动满的斑点 之间的距离，不能够提高分离效能

开口槽展开法 薄层板在没有上盖的展开槽中展开。展开 过程中展开剂随时可以蒸发。越往上蒸发 越快。当展开剂到达一定高度时,上行展 开剂与蒸发展开剂速率相等,此时形成了 负的速度梯度,提高了移动慢的组分的分 离度,而降低了移动快的组分的分离度

开口槽展开法 v 薄层板在没有上盖的展开槽中展开。展开 过程中展开剂随时可以蒸发。越往上蒸发 越快。当展开剂到达一定高度时，上行展 开剂与蒸发展开剂速率相等，此时形成了 负的速度梯度，提高了移动慢的组分的分 离度，而降低了移动快的组分的分离度

热板展开法 在薄层板的背面用热块加热。在高分离度区 域加热,形成溶剂速度梯度和溶剂极性梯度, 从而改善分离度并可使斑点高度浓缩,提高 痕量组分的检测灵敏度。 令连续展开是分离结构相似的多组分的有效方 法。为了防止蒸发时色谱条件受槽外条件影 响和展开剂污染空气,可以用在薄板顶端加 吸附剂(多层滤纸)吸附展开剂的方法

热板展开法 v 在薄层板的背面用热块加热。在高分离度区 域加热，形成溶剂速度梯度和溶剂极性梯度， 从而改善分离度并可使斑点高度浓缩，提高 痕量组分的检测灵敏度。 v 连续展开是分离结构相似的多组分的有效方 法。为了防止蒸发时色谱条件受槽外条件影 响和展开剂污染空气，可以用在薄板顶端加 吸附剂（多层滤纸）吸附展开剂的方法

梯度展开法与双向展开法 令梯度展开法 令展开过程中不断按照一定比例改变展开剂中 溶剂的组成。 这种方法有时能够提高分离效果,特别是反 相薄层色谱中常用。 令双向展开法 令将试样点在薄层板的一角,先沿一个方向展 开。取出薄层板,干燥后旋转90o,然后再用 同一种展开剂或换另一种展开剂沿另一方向 展开。使前一次展开后的重叠斑点得以分离

梯度展开法与双向展开法 v 梯度展开法 v 展开过程中不断按照一定比例改变展开剂中 溶剂的组成。 v 这种方法有时能够提高分离效果，特别是反 相薄层色谱中常用。 v 双向展开法 v 将试样点在薄层板的一角，先沿一个方向展 开。取出薄层板，干燥后旋转90 o ，然后再用 同一种展开剂或换另一种展开剂沿另一方向 展开。使前一次展开后的重叠斑点得以分离

双向展开法特点 令双向展开法还可以用以检测对光、热、酸 碱不稳定的组分。试样斑点经第一次展开后 用光照或加热或用酸碱处理,旋转90°,再用 相同的展开剂在相同条件下展开,凡是在对 角线上的斑点都是稳定的,凡是不在对角线 上的点都是分解产物或反应产物

双向展开法特点 v 双向展开法还可以用以检测对光、热、酸、 碱不稳定的组分。试样斑点经第一次展开后 用光照或加热或用酸碱处理，旋转90 o ，再用 相同的展开剂在相同条件下展开，凡是在对 角线上的斑点都是稳定的，凡是不在对角线 上的点都是分解产物或反应产物

多次展开法 试样经一次展开不能的到很好的分离结果时 是薄层板上的溶剂挥发后重新用展开剂展开 如此反复多次,直到有满意分离结果为止

多次展开法 v 试样经一次展开不能的到很好的分离结果时， 是薄层板上的溶剂挥发后重新用展开剂展开。 如此反复多次，直到有满意分离结果为止

单向或双向多次展开 令同一种展开剂单向或双向多次展开,反复展 开时由于后沿比前沿移动快,可以使散开的 斑点合拢,提高检测灵敏度。用两种或两种 以上不同的展开剂分别进行多次展开,可以 将不同的的组分分开,称为阶梯式展开或多 极展开

单向或双向多次展开 v 同一种展开剂单向或双向多次展开，反复展 开时由于后沿比前沿移动快，可以使散开的 斑点合拢，提高检测灵敏度。用两种或两种 以上不同的展开剂分别进行多次展开，可以 将不同的的组分分开，称为阶梯式展开或多 极展开。 v