甘肃农业大学：《动物遗传学》课程教学资源（实验指导）实验二 减数分裂

实验二 减数分裂 “、实验目的 观察动物减数分裂的过程，掌握动物精巢减数分裂的制片方法。 二、实验原理 动物生殖细胞在减数分裂时，一个精母细胞连续分裂两次，形成四个精细胞，但在此过程 中精母细胞的染色体却只复制一次，所以，减数分裂后所产生的每个子细胞中染色体数目却只有 精母细胞的一半，而且，在减数分裂过程中，染色体将发生一系列形态结构上的变化。这些是我 们研究动物染色体的好材料。 动物在配种季节里（无发情季节为终年）精母细胞都在不断地分裂增殖形成精子，因此， 取出睾丸组织，经过低渗液固定等适当处理，制成细胞悬液，再用空气干燥法制片，所得标本常 可观察到减数分裂的各个时期。 三、实验材料 性成熟的公鸡 四、实验仪器和药品 显微镜，手术刀，剪刀，镊子，表面皿，烧杯，滴管，尖底离心管，离心机(1000转)， 玻璃棒，水浴锅 生理盐水，0.075MKCL溶液，Giemsa染液，Canonyl固定液(3甲醇：1冰醋酸) 四、实验方法 (一)动物睾丸减数分裂标本制作 1.手术法取出性成熟公鸡睾丸，用生理盐水洗去血液及血。置于盛有少量0.075MKC1溶液 表面皿中，将睾丸用锐利的剪刀剪碎，随即用瓷杆研磨5-10分钟。 2.将睾丸组织悬液移入尖底离心管中，在200rpm离心3-4分钟，使块状组织沉底，用吸管 吸取中层的细胞悬液2-4m1,移入另一离心管中，加入等量0.075MKC1在37℃恒温水浴箱中低渗 20-30分钟。 3.取出离心管，沿瓶壁加入1m1固定液，吹打均匀后在1000rpm离心6分钟，吸去上清液， 得细胞沉淀。 4.加入新配制的固定液(3甲醇：1冰醋酸)5m1,5分钟后，用吸管将细胞团块轻轻打散， 固定20分钟 5.在1000rpm离心10分钟，去上清液。 6.再加入新配制的固定液5ml,5分钟后，用吸管将细胞团块轻轻打散，固定20分钟

7.再次在1000rpm离心10分钟，去上清液。 8.视细胞的多少加入适量的固定液。 9.制片：取一张先在冰箱(0-4℃)中的清洁载玻片，用滴管吸取1一4滴细胞悬液，用嘴 吹气使细胞分散，再通过火焰使其干燥。 10.用6-8%Giemsa染液（改良苯酚品红染液）染色20-30分钟。用清水冲洗后镜检。 11.镜检：找出减数分裂各个时期的细胞。 五、作业： 绘出你所看到的鸡减数分裂中各时期简图。 附：染液的配制 l.Giemsa原液 称重1克Giemsa染料，溶于66毫克干油中（研钵中研细，置56℃恒温水浴锅90分钟），冷却 后，加入65毫升甲醇混合，过滤装入棕色瓶中备用。此液为原液。 2.磷酸盐缓冲液配制 取2.2gNa2HP04·12H20和0.55gNaH2P04·2H20置于100m1容量瓶中，加入约30ml蒸馏水溶解 后用蒸馏水定容至100ml,PH值为7.0-7.2。 3.Giemsa.工作液 姬姆萨染液的配制方法为原液、缓冲液、蒸馏水的比例为2：3：5。 4.改良苯酚品红溶液的配制。 ①复红原液 碱性品红 3g 70%酒精 100ml ②染色液 复红原液 10ml 5%苯酚水溶液 90m1 冰醋酸 10ml 甲醛 10m1 (染液配成后，放置24小时，过滤后方可使用)