甘肃农业大学：《园艺植物组织培养》课程教学资源（实验教学大纲，打印版）

园艺植物组织培养实验教学大纲 (课程代码：010055实验学时：10学时) 一、实验教学的目的 通过实验教学使学生掌握园艺植物组织培养的基本方法和试管快繁的基本程序，能够比 较熟练地进行培养基的配制、培育材料的选择与消毒、无菌操作与接种、组织培养常用仪器 设备的使用，能正确分析组织培养过程中出现污染、褐化、玻璃化等常见问题的原因并采取 相应的处理措施，具备独立完成植物组织培养全过程的基本操作能力。为学习植物生物技术 和从事相关的科研与生产工作奠定良好的实践基础。 二、实验教学的基本要求 该课程实验分必修实验和选修实验两部分。必修实验是该课程必须掌握的基本实验技 能，要求在计划实验学时内完成，并提交实验报告，是实验课成绩评定的依据。选修实验主 要是为了拓展学生的实验技能，培养学生的创新能力和创新精神，由学生自行选择，在教师 的指导下通过实验室开放完成，要求提交实验总结或报告，但不作为实验成绩评定依据。 实验分验证性实验和综合性设计性实验两种类型，必修实验中应至少有一个综合性设计 性实验。 三、学生应掌握的实验技术和基本技能 实验教学环节中要求学生必须掌握的基本实验技能有：MS固体培养基的配制及灭菌方 法、外植体的消毒与无菌操作、植物叶片不定芽的诱导方法、茎尖的剥离和培育方法、试管 苗气孔观察与蒸腾强度的测定方法。 要求学生掌握超净工作台、高压灭菌锅、体式显微镜、移液器、干燥箱、人工气候箱等 仪器设备的使用方法和注意事项。 选修实验通过开放实验室让学生了解和掌握的实验技术有：培养基母液的配制方法、胚 培养方法、试管苗继代与生根培养技术、再生植株的驯化移栽技术。 四、实验项目、性质和学时分配 序号 实验项目名称 学时 性质 是否必修 MS培养基母液的配制 验证性 否 2 MS固体培养基的配制与灭菌 2 验证性 是 外植体的消毒与无菌操作 验证性 是 4 植物叶片不定芽诱导 2 设计性 是 植物茎尖的剥离与培养 2 综合性 是 6 胚培养 2 设计性 否 7 试管苗继代与生根培养 2 验证性 否

8 再生植株的驯化移栽 2 验证性 否 9 果树试管苗气孔观察与蒸腾强度的测定 2 验证性 是 备注 实验性质指验证性、设计性、综合性。 五、内容 实验一MS培养基母液的配制 1.实验目的 了解MS培养基母液的组分，掌握培养基母液配制的基本原则。 2.实验内容 根据MS培养基配方，配制MS培养基母液，大量元素母液配成20X,CaCl22H0母液 100X,微量元素母液100X,铁盐母液100X,有机成分母液100X,并将配好的母液依次贴 好标签，保存于4℃冰箱。 3.实验仪器与材料 (1)实验药品药品按MS培养基配方准备：激素按需要准备：蒸馏水：95%乙醇：1mol/L 盐酸；1mol/LNaOH。 (2)实验仪器1/100电子天平、1/10000电子天平：冰箱：烧杯：量筒：容量瓶： 磁力搅拌器：试剂瓶：标签纸等。 4.实验的要点与教学建议 (1)生长素类用95%的乙醇助溶，细胞分裂素类用0.5~1.0mol/L的NaOH或HC1助溶， 助溶后的乙醇溶液、NaOH或HCI溶液逐渐稀释到蒸馏水内，边稀释边搅拌。不可将蒸馏 水直接加入到助溶液中，否则不能充分溶解。 (2)母液配制好后要及时贴上标签。标签内容包括：培养基名称、母液类别、扩大倍数 (激素类写称取量)、定容体积、抽取量(ml/L)、配制日期。 实验二MS固体培养基的配制与灭菌 1.实验目的 掌握固体培养基的基本配制方法和程序：掌握培养基灭菌的方法及操作要求。 2.实验内容 在搪瓷盆中加入计划配制培养基量(L)的80%的蒸馏水→母液抽取→加入蔗糖→pH值 调整→定容一熬制→定容→分装→封口→灭菌→平放冷却。 3.实验仪器与材料 (1)实验药品蔗糖、琼脂、1mol/L NaOH、0.lmol/L NaOH、lmol/LHCl、MS培养基 的母液，植物生长调节物质母液。 (2)实验仪器电子天平、电子称、磁力搅拌器、搪瓷盆、烧杯(50ml、100ml、1000ml)、 量简(10ml、50ml、1000ml,)、药勺、称量纸、玻璃棒、移液管或移液枪、电磁炉、吸耳 球、酸度计、三角瓶(100ml)、封口膜、棉线绳、高压灭菌锅。 4.实验的要点与教学建议

(1)琼脂一定要煮沸煎熬使其充分溶解，否则培养基凝固不均匀或不清亮。 (2)pH值要在添加琼脂和加热之前进行调整。酸度计电极切忌插入熬制后的热培养基 中。 (3)要求提交实验报告。 实验三外植体的消毒与无菌操作 1.实验目的 掌握外植体的表面消毒方法。掌握接种方法与无菌操作技术。识别培养物的污染类型及 褐化现象。 2.实验内容 (1)超净工作台的使用方法及无菌操作程序。 (2)外植体消毒与接种：外植体采集→剪切一→流水冲洗→消毒→无菌水冲洗→接种。 (3)观察与统计。外植体污染种类识别与统计：褐化现象观察与统计。成活率统计。 3.实验仪器与材料 (1)实验材料园艺植物茎段。 (2)试剂0.1%升汞，84消毒液，70%酒精，无菌水等。 (3)器具镊子、剪刀、酒精灯、棉球、三角瓶、火柴、培养皿（无菌）、无茵滤纸，超 净工作台。 4.实验的要点与教学建议 (1)与培养基的配制相结合，让学生自己设计培养基、自行选择外植体材料。 (2)在实验教学过程中应该开放实验室，以便学生观察实险现象和统计实险结果。 (3)要求提交实验报告。 实验四 植物叶片不定芽诱导 1.实验目的 掌握用叶片做外植体诱导不定芽产生的方法：观察叶片不定发生的过程：熟悉试验设计 和统计分析的方法。 2.实验内容 (1)叶片再生不定芽培养基设计与配制：基本培养基选择；激素组合设计（可用正交 试验设计)。 (2)外植体材料选择：叶片不同部位选择；放置方式。 (3)培养条件选择：温度、光照 3.实验仪器与材料 (1)实验材料烟草、甜瓜、葡萄试、苹果、骆驼刺等植物的试管苗或种子。 (2)试剂0.1%升汞、70%酒精、植物激素、无菌水、滤纸等。 (3)器具镊子、手术刀、剪刀、酒精灯、棉球、三角瓶、火柴、培养皿（无菌）、无菌 滤纸，超净工作台。 4.实验的要点与教学建议 (1)要求学生了解正交实验设计的方法与统计分析方法

(2)要求提交实验报告。 实验五 植物茎尖的剥离与培养 1.实验目的 掌握植物茎尖剥离与无菌培养的方法。 2.实验内容 (1)茎尖培养基的配制。 (2)在体视显微镜下剥离、观察植物的茎尖 (3)茎尖材料的消毒、剥离、切取、接种。 3.实验仪器与材料 (1)植物材料大蒜鳞茎、香石竹等园艺植物的新梢。 (2)试剂0.1%升汞、70%酒精、无菌水等。 (3)实验仪器及器具镊子、手术刀、剪刀、酒精灯、棉球、三角瓶、火柴、培养皿（无 菌)、无菌滤纸、超净工作台、体视显微镜等。 4.实验的要点与教学建议 (1)要求学生在实验前了解植物茎尖的基本结构。 (2)根据体视显微镜下的观察结果，绘制植物的茎尖结构图。 (3)要求提交实验报告。 实验六胚培养 1.实验目的 掌握胚离体培养和胚挽救的基本方法和操作程序。 2.实验内容 (1)胚培养基的配制 (1)幼果、种子的采集与表面消毒。 (2)胚的剥离与接种 3.实验仪器与材料 (1)植物材料葡萄、苹果、桃、枣、西瓜、甜瓜、牡丹等园艺植物的幼果或种子。 (2)试剂0.1%升汞、70%酒精、无菌水等。 (3)实验仪器超净工作台、高压灭菌锅、实体解剖镜或放大镜、镊子、解剖刀、解剖 针、烧杯、培养皿、三角瓶等。 4.实验的要点与教学建议 (1)幼胚培养适宜取材时期的确定。尤其对胚容易败育的品种，一定要在胚败育前进 行离体胚培养。 (2)对成熟种子，尤其是干燥种子，在胚剥离前要对种子进行软化处理。 实验七试管苗继代与生根培养 1,实验目的 掌握试管苗继代增殖的接种方法：掌握试管苗生根培养的方法

2.实验内容 (1)不定芽方式增殖培养的接种方法。 (2)单芽茎段增殖培养的接种方法。 (3)试管内生根方式及发根过程观察。 3.实验仪器与材料 （1)实验材料甜瓜、苹果、葡萄等园艺植物的试管苗和丛生芽。 (2)试剂培养基母液、植物激素等。 (3)实验仪器及器具超净工作台、高压灭菌锅、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、三角瓶 等。 4.实验的要点与教学建议 (1)在继代培养过程中，观察了解培养基中细胞分裂素/生长素的比值对不定芽和茎段 生长的影响。 (2)在生根培养中，观察了解培养基中大量元素含量对生根的影响。 实验八再生植株的驯化移栽 1.实验目的 掌握试管苗的炼苗基本方法和过程。掌握试管苗移栽的基本方法和管理要点。 2.实验内容 (1)试管苗炼苗的方法：闭瓶炼苗→开瓶炼苗。 (2)移栽方法：从三角瓶中取出试管苗→冲洗→移栽→撒水→扣小拱棚。 (3)移栽后管理方法。 3.实验仪器与材料 (1)实验材料甜瓜、葡萄、苹果等生根试管苗，小拱棚支架、棚膜、营养钵、营 养液、蛭石、珍珠岩、田间土等。 (2)工具喷壶、铲子等。 4.实验的要点与教学建议 (1)在移栽时一定要清洗干净试管根系上的培养基，以免移栽后出现污染问题。 (2)在开瓶炼苗时，可以在三角瓶内补充少量的凉开水，以免试管苗失水菱蔫。 (3)在炼苗过程中，尽量控制污染，试管苗要在出现污染之前进行移栽。 实验九果树试管苗气孔观察与蒸腾强度的测定 1,实验目的 掌握试管苗气孔的观察方法和形态特征。了解试管苗的蒸腾特点。 2.实验内容 (1)利用透明胶带法观察试管苗气孔。 (1)用称重法测定试管苗的蒸腾强度。 3.实验仪器与材料 (1)实验材料葡萄、苹果、烟草等试管苗与相应的盆栽苗，透明胶带，蒸馏水，品红 染液、滤纸、纱布

(2)实验仪器显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、1/10000电子天平、 显微照相系统。 4.实验的要点与教学建议 (1)在用透明胶带法撕取材料时一定要多次练习，准确掌握力度，避免撕取的材料不 均匀，造成片子上气孔的重叠。 (2)在测定试管苗叶片蒸腾强度时，建议用相应的盆栽苗叶片做比较，以更好地理解 试管苗极易失水的特性。 六、实验教学考试、考核办法和评分标准 实验成绩评定依据实验报告成绩综合评定。实验报告按“优”、“良”、“中”、“及格”、 “不及格”五个等级评分，对应百分制分数分别为95分、85分、75分、65分、55分，缺 少实验报告按“0”分记本次实验成绩。按应开设必修实验报告的平均成绩计算实验课成绩。 实验成绩占课程总成绩的20%