东北农业大学《生物显微技术》课程教学资源（PPT课件）第五章 原位杂交

原位杂交组织化学

原位杂交组织化学

核酸分子杂交技术 固相杂交 菌落原位杂交( colony in situ hybridization) 斑点杂交法( Dot blot Southern印迹杂交( Southern blot ■ Northern印迹杂交( Northern blot) 组织原位杂交( Tissue in situ hybridization) 液相杂交

核酸分子杂交技术 固相杂交: ◼ 菌落原位杂交（colony in situ hybridization） ◼ 斑点杂交法（Dot blot） ◼ Southern印迹杂交（Southern blot） ◼ Northern印迹杂交（ Northern blot） ◼ 组织原位杂交（Tissue in situ hybridization） 液相杂交

DNA∽ DNA is digested with a restriction endonuclease 入 Restriction fragments of different sizes are separated by gel electrophoresis. Migration Paper towels Filter The DNa is denatured and transferred to a filter by passage of a salt solution through the gel Salt solution X-ray fil DNA ragments< Filter The filter is hybridized The probe bound to the with a radioactive √A filter is detected by probe, which binds to autoradiography complementary which reveals the DNA DNA sequences. fragment to which the probe hybridized

定义: 特定标记的已知序列的核酸作为探针与细胞或组织 切片中的核酸进行杂交并对标记的探针进行检测的 方法称为原位杂交

定义： 特定标记的已知序列的核酸作为探针与细胞或组织 切片中的核酸进行杂交并对标记的探针进行检测的 方法称为原位杂交

ITotal cell DNA mixture of different double-stranded molecules 95°c Denature 22 Detection of DNA Strands separate by nucleic acid Add radioactive hybridization DNA probe 65°c complementary to Renature specific cell DNA sequence Radioactive probe hybridizes to complementary sequences in cell DNA

Detection of DNA by nucleic acid hybridization

核酸探针标记方法: 放射性探针:2P3H35S 2.非放射性探针:生物素、地高辛 探针的核酸性质不同: 1.DNA探针:单链DNA( Single stranded,sNA)和 双链DNA( Double stranded, dsDNA) CDNA探针: complementary dna probe 3.cRNA探针: complementary rna probe 寡核苷酸探针

分类 核酸探针标记方法： 1. 放射性探针：32P 3H 35S 2. 非放射性探针：生物素、地高辛 探针的核酸性质不同： 1. DNA探针：单链DNA（Single stranded, ssDNA）和 双链 DNA（Double stranded, dsDNA） 2. cDNA探针：complementary DNA probe 3. cRNA探针：complementary RNA probe 4. 寡核苷酸探针

原理 ■探针标记:同位素标记和非同位素标记 的探针(生物素标记和地高辛标记) 探针与靶序列根据碱基互补配对原则特 异性结合 检测标记的探针:放射自显影、荧光检 测和酶法检测

原理 ◼ 探针标记：同位素标记和非同位素标记 的探针（生物素标记和地高辛标记） ◼ 探针与靶序列根据碱基互补配对原则特 异性结合 ◼ 检测标记的探针：放射自显影、荧光检 测和酶法检测

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优点 ■不需要从组织中提取核酸,对组织中含量 极低的靶序列具有极高的敏感性。 能够完整的保持组织和细胞的形态,能更 准确地反映组织细胞的功能状态以及功能 上的相互联系

优点 ◼ 不需要从组织中提取核酸，对组织中含量 极低的靶序列具有极高的敏感性。 ◼ 能够完整的保持组织和细胞的形态，能更 准确地反映组织细胞的功能状态以及功能 上的相互联系

应用 特定的核酸序列在染色体中的精确定位。 ■与细胞内的RNA杂交观察该基因的定位、定量表 达 用特异性的细菌或病毒的核酸作为探针对组织或 细胞进行杂交,以确定有无病原体的感染

应用 ◼ 特定的核酸序列在染色体中的精确定位。 ◼ 与细胞内的RNA杂交观察该基因的定位、定量表 达。 ◼ 用特异性的细菌或病毒的核酸作为探针对组织或 细胞进行杂交，以确定有无病原体的感染