《免役组化生物学》 IH复习提纲

I复习提纲 课程性质及特点 免疫组织化学是一门研究利用核素或非核素 标记物作为显示手段,并借助免疫化学或亲合化 学的专一性和高灵敏性,原位示踪组织或细胞中 的抗原或抗体的应用科学,是一项敏感、特异的 原位示踪染色技术。 特点:特异、敏感(ng或pg水平),原位、形 态-机能-代谢三位一体

IH复习提纲 一、课程性质及特点 免疫组织化学是一门研究利用核素或非核素 标记物作为显示手段，并借助免疫化学或亲合化 学的专一性和高灵敏性，原位示踪组织或细胞中 的抗原或抗体的应用科学，是一项敏感、特异的 原位示踪染色技术。 特点：特异、敏感（ng或pg水平），原位、形 态-机能-代谢三位一体

技术类型 I的技术类型多样,彼此通用,各有特 点 (1)以标记物种类分:放射免疫自显影, 免疫荧光、免疫酶标、亲合免疫酶标、络合 放大免疫酶标(CSA、Epos、 En vision、 UIP)、免疫重金属标记(胶体金、铁蛋白) 等

二 、技术类型 IH的技术类型多样，彼此通用，各有特 点。 （1）以标记物种类分：放射免疫自显影， 免疫荧光、免疫酶标、亲合免疫酶标、络合 放大免疫酶标（CSA 、 Epos 、 EnVision 、 UIP） 、 免疫重金属标记（胶体金、铁蛋白） 等

(2)以标记物交联特点分:标记抗体 (直接法和间接法)、不标记抗体(桥 法和复合物法)。 (3)以显示敏感度分;单标记、重复 标记(双PAP、 PAP-ABC法等)、网络 标记( Envision、CSA法等)

（2）以标记物交联特点分：标记抗体 （直接法和间接法）、不标记抗体（桥 法和复合物法）。 （3）以显示敏感度分；单标记、重复 标记（双PAP、PAP-ABC法等）、网络 标记（EnVision、CSA法等）

目前应用较广且较为敏感的技术有 PAP、S-P、sABC、IGSS(间接法)和 En vision法等。 般来说,免疫光镜多采用SP(间 接法)、sABC法HPO、IGSS法(间接 法)和 En vision(间接法);免疫电镜多 采用IGS法(间接一一包埋后)

目前应用较广且较为敏感的技术有 PAP、S-P、sABC、IGSS（间接法）和 EnVision法等。 一般来说，免疫光镜多采用S-P（间 接法）、sABC法-HPO、IGSS法（间接 法）和EnVision（间接法）；免疫电镜多 采用IGS法（间接－－包埋后）

免疫试剂 I的关键试剂为抗体:计有特异性抗 体(第一抗体示踪试剂)、桥连抗体 (第二抗体放大试剂)和标记抗体(第 抗体、显示试剂)等。目前商品化的 各种抗体试剂多为鼠系单克隆抗体,应用 中必需注意种系匹配和免疫学亲和对应原 理

三、免疫试剂 IH的关键试剂为抗体：计有特异性抗 体（第一抗体-示踪试剂）、桥连抗体 （第二抗体-放大试剂）和标记抗体（第 三抗体、-显示试剂）等。目前商品化的 各种抗体试剂多为鼠系单克隆抗体，应用 中必需注意种系匹配和免疫学亲和对应原 理

四、组织处理和切片选择 免疫组织化学中组织处理的原则是 保留抗原、维护结构”;操作中注意 “及时固定、温和短时”;“石蜡优先, 冰冻跟上”;“暴露决定簇,阻断内源 干扰

四、组织处理和切片选择 免疫组织化学中组织处理的原则是 “ 保留抗原、维护结构”；操作中注意 “ 及时固定、温和短时”；“ 石蜡优先， 冰冻跟上”；“ 暴露决定簇，阻断内源 干扰

常用于石蜡包埋组织固定剂有:10% 中性甲醛、4%缓冲多聚甲醛、PLP液等。 载玻片做到清洁、无尘、防脱片 (预涂粘片白胶-10%或多聚赖氨酸0.05% 或3氨丙基三乙氧硅烷2%)

常用于石蜡包埋组织固定剂有：10％ 中性甲醛、4％缓冲多聚甲醛、PLP液等。 载玻片做到清洁、无尘、防脱片 （预涂粘片白胶-10%或多聚赖氨酸0.05% 或3-氨丙基三乙氧硅烷2％）

五、方法原理与选择根据 免疫组化染色方法类型众多,基本原 理大同小异,但由于标记交联显示方法的 不同,其技术的检测敏感性上存在某些差 异,可按工作实际与实验室条件,加以选 用

▲五 、 方法原理与选择根据 免疫组化染色方法类型众多，基本原 理大同小异，但由于标记交联显示方法的 不同，其技术的检测敏感性上存在某些差 异，可按工作实际与实验室条件，加以选 用

目前文献中仍以酶标记应用报道最多, 尤其是与亲合物的结合。例如LsAB-HPO 间接法(或称SP间接法), SABC-HPO法, LSAB-AKP法,sABC-AKP法,其次是 PAP法或 APAAP法,IGSS间接法。 免疫荧光间接法尚有一定应用价值 仍可见于诸文献报道。免疫胶体金间接法 (5nm或10m)主要应用于免疫电镜

目前文献中仍以酶标记应用报道最多， 尤其是与亲合物的结合。例如LsAB－HPO 间接法(或称SP 间接法 ），sABC-HPO法， LsAB-AKP法， sABC -AKP法，其次是 PAP法或APAAP法，IGSS间接法。 免疫荧光间接法尚有一定应用价值， 仍可见于诸文献报道。免疫胶体金间接法 （5nm或10nm）主要应用于免疫电镜

新近,为了适应快速IH诊断的需要 采用高分子葡聚糖作交联载件,预先连接 标记酶和抗体,组成巨大免疫示踪试剂分 子,使免疫组化染色操作流程大大简化和 标准化,并由于检测复合物的分子量的增 大而进一步提高了方法的灵敏度。该类增 敏放大方法有多种,其中以EnⅤ ISIon法的 应用报道最多,并已有商品试剂供应

新近，为了适应快速IH诊断的需要， 采用高分子葡聚糖作交联载件，预先连接 标记酶和抗体，组成巨大免疫示踪试剂分 子，使免疫组化染色操作流程大大简化和 标准化，并由于检测复合物的分子量的增 大而进一步提高了方法的灵敏度。该类增 敏放大方法有多种，其中以EnVision法的 应用报道 最多，并已有商品试剂供应